2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)
目录号 : GK100352×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)是一种包含蓝色染料的快速简单即用型的 PCR 预混液，适用于超快速 PCR 反应。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)是一种包含蓝色染料的快速简单即用型 PCR 预混液，适用于超快速 PCR 反应。
反应体系中只需要添加引物，模板和ddH2O。产品已含蓝色染料，在PCR 反应完成后，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳, 蓝色染料可指示电泳进程，其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与500 bp 双链DNA 片段相近。
2×Taq PCR Super Fast Mix(with blue dye)适用于超快速PCR反应（延伸速度可以达到5-10 sec/kb，最短半小时完成PCR）、复杂模板如GC含量高（>60%），有二级结构等的扩增和大规模基因检测。短片段或者简单模板（如质粒模板）可以尝试5 sec/kb延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短PCR时间；长片段(≥3kb)或者复杂模板产量较低时可以采用15-20 sec/kb的延伸速度或者采用较多循环数。
本产品适用于大规模基因检测，半定量PCR实验和微量DNA的检测；表达基因的克隆、细胞内基因点突变的分析（SNP）等超快PCR扩增。
应用建议：
本产品扩增能力极强，有时会出现非特异性扩增，可通过以下方法减少非特异性扩增条带。
（1）提高退火温度2-3度；
（2）减少mix量，如将10 μl改为8 μl；
（3）减少2个循环次数，以减少非特异性扩增条带。
本方案仅提供指导，实际应用应根据您的需要进行修改。
注：模板用量：10~1000 ng基因组 DNA；1~30 ng 质粒或1~2μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上示例为常规PCR反应体系，仅供参考，实际反应条件因模板、引物等结构不同而异，需根据模板、引物、目的片段的特性设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。
常见问题解答（FAQs）:
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常见问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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PCR产物没有或非常少 |
引物设计不佳。 |
选择适当的引物设计软件进行引物设计。 |
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待扩增片段GC含量偏高或片段长。 |
推荐使用更适合的DNA聚合酶如2×Taq PCR Fusion-Fast Mix(with blue dye) (目录：GK10036)。 |
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退火温度不佳；延伸时间太短；循环数太少。 |
优化PCR实验条件。 |
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模板浓度过低；实验样品 DNA损伤或降解。 |
适当加大模板量；重新制备模板。 |
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模板质量太差。 |
用适当的DNA纯化方法纯化模板DNA（例如柱纯化）。 |
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引物浓度过低；Mg2+浓度未优化。 |
适当调整引物浓度及Mg2+浓度。 |
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扩增特异性差，非特异性扩增 |
引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体。 |
降低引物浓度，必要时重新设计引物。 |
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模板质量差；模板被污染或降解。 |
通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。 |
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PCR循环条件未优化。 |
如果出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，降低循环数调整；如果出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。 |
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空白对照出现扩增产物 |
引物设计不合理。 |
扩增序列与非目的扩增序列有同源性，PCR也可以扩增出非靶序列的序列，重新设计引物。 |
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反应体系污染。 |
若扩增产物条带大小与目的条带不一致，说明有污染；更换新的Mix、水或引物重复实验；反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。 |
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扩增的条带亮度不够 |
引物降解。 |
检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解，必要可更换引物。 |
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模板质量。 |
首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，制备新鲜DNA作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。 |
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酶浓度不佳。 |
可适当提高酶的使用量。 |
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PCR循环条件未优化。 |
可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。 |
| 应用&特点 | 1. 基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。
2. 超快PCR扩增：如表达基因的克隆、细胞内基因点突变的分析（SNP）等。 3. PCR产物具有3'末端dA突出，可进行后续TA克隆。 |
| 运输方式 | 蓝冰运输。 |
| 储存条件 | 长期保存，请置于-20˚C，有效期24 个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。 |
| 用途 | 仅供研究使用!不能用于人体。 |