4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)
(Synonyms: 4-叠氮基-L-苯丙氨酸,p-Azidophenylalanine; p-Azido-L-phenylalanine) 目录号 : GC30007
4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)是L-苯丙氨酸的非天然氨基酸类似物，含有叠氮部分。4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)标记是一种快速、灵敏且无放射性的替代传统检测新生蛋白质合成技术的方法。
Cas No.:33173-53-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine) is an unnatural amino acid analog of L-phenylalanine that contains an azide moiety. 4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)-labeling is a fast, sensitive, and non-radioactive alternative to the traditional technique for detecting nascent protein synthesis.
4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine) is randomly incorporated into synthesizing protein instead of phenylalanine during translation. The resulting azide-labeled full-length proteins can be detected via copper-catalyzed click reaction (with fluorescent or biotin-labeled alkynes) or copper-free click reaction (with cycloalkynes) and used for subsequent microscopic imaging or purification tasks.
References:
[1].Peng Y F. Methodology to Site-Specifically Label SBDS Domains to Monitor Dynamics of 60S Ribosomal Subunit Interactions[D]. Saint Louis University, 2023.
4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)是L-苯丙氨酸的非天然氨基酸类似物，含有叠氮部分。4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)标记是一种快速、灵敏且无放射性的替代传统检测新生蛋白质合成技术的方法。
在翻译过程中，4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)代替苯丙氨酸随机掺入合成蛋白质中。所得的叠氮化物标记的全长蛋白质可以通过铜催化的点击反应（使用荧光或生物素标记的炔烃）或无铜点击反应（使用环炔烃）进行检测，并用于后续的显微成像或纯化任务。
本方案仅提供指导，实际应用请根据您的需要进行修改。
通过叠氮-炔烃点击化学在活细胞中进行非天然氨基酸标记[1]。
1.细胞培养：
转染前24小时，将HEK293T细胞培养在18mm聚赖氨酸涂层玻璃盖玻片上，细胞培养基改为添加0.65mM 4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)的完全培养基。
2.转染实验
使用Lipofectamine 3000试剂将pIRE4-Azi质粒（1:1 w/w）转染细胞。24小时后，更换含0.65mM 4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)的培养基，并将细胞再培养24小时（总表达量为48小时）。标记前30分钟，除去补充有4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)的生长培养基，用含有128mM NaCl、2mM KCl、2.5mM CaCl2、1.2mM MgCl2、10mM蔗糖、10mM HEPES和pH7.4的胞外缓冲液洗涤细胞两次，并保持在不含4-Azido-L-phenylalanine (p-Azidophenylalanine)的生长培养基中。
3.通过叠氮-炔烃点击化学在活细胞中标记非天然氨基酸
3.1配制储备溶液
Cy3.5（目录号：GC19610）炔烃染料溶于DMSO，制备10mM储存液，BTTES（Click Chemistry Tools）50mM，硫酸铜（目录号：GB57835）20mM，氨基胍（目录号：GC15727）100mM，(+)-L-抗坏血酸钠（目录号：GC13616）100mM 加入超纯蒸馏水中。
3.2点击化学反应标记非天然氨基酸
A：在656µl细胞外缓冲溶液中，将Cy3.5染料混合至终浓度分别为20µM。将新鲜的硫酸铜溶液和BTTES（摩尔比为1:5）预混合，然后添加至最终浓度为150µM。接下来，添加氨基胍以使终浓度为1.25mM，并添加(+)- L-抗坏血酸钠使终浓度为2.5mM。总标记体积为0.7mL。
B：将完成标记的混合物在4°C下孵育8分钟，然后在室温下孵育2分钟，避光后加入细胞中。加入标记混合物前清洗细胞。标记过程中，将细胞置于37°C和5％CO2的黑暗环境中10-15分钟。标记后，用细胞外缓冲液清洗细胞两次。使用共聚焦显微镜在591/604nm处观察Cy3.5标记产物。
References:
[1].Schamber M R, Vafabakhsh R. Mechanism of sensitivity modulation in the calcium-sensing receptor via electrostatic tuning[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 2194.
| Cas No. | 33173-53-4 | SDF | |
| 别名 | 4-叠氮基-L-苯丙氨酸,p-Azidophenylalanine; p-Azido-L-phenylalanine | ||
| Canonical SMILES | O=C(O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 | ||
| 分子式 | C9H10N4O2 | 分子量 | 206.2 |
| 溶解度 | Water : 6.2 mg/mL (30.07 mM; ultrasonic and adjust pH to 6 with HCl);DMSO : 6 mg/mL (29.10 mM; ultrasonic and adjust pH to 6 with HCl) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.8497 mL | 24.2483 mL | 48.4966 mL |
| 5 mM | 0.9699 mL | 4.8497 mL | 9.6993 mL |
| 10 mM | 0.485 mL | 2.4248 mL | 4.8497 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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