5-BrdU
(Synonyms: 5-溴脱氧尿嘧啶核苷; BrdU; 5-Bromo-2'-deoxyuridine; BUdR) 目录号 : GC11940
5-溴-2’-脱氧尿苷（5-BrdU，5-bromo-2-deoxundine5-BrdU）是一种合成的胸苷溴化类似物，通常用于测定DNA合成和标记分裂细胞。
Cas No.:59-14-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
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- Purity: >99.00%
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- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本协议仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO或去离子水溶解5-BrdU固体，终浓度为10 mM，过滤除菌。
注意：未使用的储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：正式实验前，用实验缓冲液稀释储存液到所需的工作浓度，过滤除菌。
注意：特定应用的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索，以获得最佳条件。工作液必须现配现用。
2. 5-BrdU体外标记细胞
（1）称取3mg 5-BrdU溶于1ml去离子水，充分溶解即可。制备10mM BrdU储存液。用细胞培养基按照1:1000的比例将储存液稀释到10μM BrdU染色液，并在无菌条件下用0.2µm滤膜对染色液进行过滤除菌。
（2）吸掉细胞内培养基并更换无菌的10µM BrdU染色液，置于CO2培养箱37℃孵育1-24h。
（3）吸掉细胞内染色液，用PBS清洗2次，每次至少5s。
（4）根据标准免疫细胞化学（ICC）操作流程进行细胞固定和透化。但是在开始免疫染色前需参照下述的DNA变性步骤.
注意：5-BrdU孵育时间取决于细胞分裂速度，原代细胞可能要高达24h，但快速增值细胞系可能仅需1h。达到最佳信噪比的时间需要通过优化条件来确定。
3. 5-BrdU体内标记
5-BrdU体内标记方法比较多，常见的是腹腔注射法。以下为腹腔注射法的步骤，其他方法可参考文献或根据实验室固有经验操作。
（1）用1x PBS溶解适量的5-BrdU配制成10mg/ml储存液，过滤除菌，按照单次用量分装冻存后待用，避免反复冻融。
（2）对于小鼠，5-BrdU通用采用的注射浓度为100mg/kg。标记完成后，根据实验室已成的步骤处理动物。
注意：5-BrdU插入快速分化组织比如小肠，在注射后30min就能检测到。但大多数组织可能需要高达24h才能检测到。合适的处理时间和注射剂量需要根据组织类型来优化。
4. DNA变性步骤
细胞样本
（1）用1-2.5M HCl室温孵育细胞10min-1h，实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间，37℃孵育可能比室温孵育效果更好。
（2）可选步骤：去除HC1，用0.1M硼酸钠缓冲液，pH8.5室温中和30min。
（3）用PBS清洗3次，每次不少于5s。根据标准IHC操作流程继续免疫染色步骤。
组织切片
（1）对于石蜡切片先做脱蜡处理。
（2）用1-2.5M HCl室温孵育切片30min-1h，实际的HCl浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间，37℃孵育可能比室温孵育效果更好。
（3）可选步骤：去除HC1，用0.1M硼酸钠缓冲液，pH8.5室温中和切片10min。
（4）用PBS清洗3次，每次不少于5s。根据标准IHC操作流程继续免疫染色步骤。
注意：5-BrdU是一种诱变剂，操作过程一定要注意防护，不要与皮肤直接接触。另外要戴口罩避免粉尘吸入。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5-BrdU (5-bromo-2-deoxundine5-BrdU) is a synthetic thymidine bromide analog that is commonly used to measure DNA synthesis and label dividing cells [1]. 5-BrdU can selectively insert into cellular DNA in place of thymidine during the S phase and can be used to study signaling pathways and other physiological processes that induce cell proliferation [2]. 5-BrdU can be probed by in vitro cell culture or in vivo injection and then specifically detected using anti-BdU antibodies [3]. After 5-BrdU labeling, an additional DNA denaturation step is required after fixation and permeabilization of tissues or cells to allow anti-5-BrdU antibodies to bind to 5-BrdU incorporated into DNA [4]. 5-BrdU antibodies can be used in combination with other cell markers such as Ki67, doublecortin (DCX) and NeuN to identify proliferating cells and newly differentiated neurons [5].
References:
[1] Zhu H. Cell proliferation assay by flow cytometry (BrdU and PI staining)[J]. Bio-protocol, 2012: e198-e198.
[2] Ziv Y, Ron N, Butovsky O, et al. Immune cells contribute to the maintenance of neurogenesis and spatial learning abilities in adulthood[J]. Nature neuroscience, 2006, 9(2): 268-275.
[3] Matiašová A, Ševc J, Mikeš J, et al. Flow cytometric determination of 5-bromo-2ʹ-deoxyuridine pharmacokinetics in blood serum after intraperitoneal administration to rats and mice[J]. Histochemistry and cell biology, 2014, 142: 703-712.
[4] Wolter S, Dittmar F, Seifert R. cCMP and cUMP in apoptosis: concepts and methods[J]. Non-canonical Cyclic Nucleotides, 2017: 25-47.
[5] Diaz F. Characterization of the Neurogenic Response to Apoptosis of Cortical Glutamatergic Neurons in the Adult Brain[M]. Yeshiva University, 2013.
5-溴-2’-脱氧尿苷（5-BrdU，5-bromo-2-deoxundine5-BrdU）是一种合成的胸苷溴化类似物，通常用于测定DNA合成和标记分裂细胞[1]。5-BrdU在S期可替代胸苷选择性插入细胞DNA，可以用来研究诱导细胞增殖的信号通路和其他生理过程[2]。5-BrdU可以通过体外细胞培养或体内注射的方式进行探针加载，然后用抗BdU的抗体进行特异性检测[3]。5-BrdU标记后，对组织或细胞进行固定和透化后，需要额外的DNA变性步骤，从而允许抗5-BrdU的抗体能够与插入DNA的5-BrdU结合[4]。5-BrdU抗体能够与其他细胞标记物如Ki67，双皮质素（DCX）和NeuN联合使用来鉴定增殖细胞和新分化神经元[5]。
| Cas No. | 59-14-3 | SDF | |
| 别名 | 5-溴脱氧尿嘧啶核苷; BrdU; 5-Bromo-2'-deoxyuridine; BUdR | ||
| 化学名 | 5-bromo-1-((2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione | ||
| Canonical SMILES | BrC(C(N1)=O)=CN(C1=O)[C@@]2([H])C[C@@](O)([H])[C@@](O2)([H])CO | ||
| 分子式 | C9H11BrN2O5 | 分子量 | 307.1 |
| 溶解度 | ≥ 15.35mg/mL in DMSO, ≥ 16.23 mg/mL in Water with ultrasonic, ≥ 11.56 mg/mL in 0.9% NS with ultrasonic | 储存条件 | 4°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2563 mL | 16.2813 mL | 32.5627 mL |
| 5 mM | 0.6513 mL | 3.2563 mL | 6.5125 mL |
| 10 mM | 0.3256 mL | 1.6281 mL | 3.2563 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。