Acridine Orange 10-Nonyl Bromide (Nonylacridine orange)
(Synonyms: 10-壬基溴代吖啶橙; Nonylacridine orange) 目录号 : GC30183
Acridine Orange 10-Nonyl Bromide（NAO）是心磷脂的高度特异性探针，常用于标记富含CL的线粒体，最大激发光/发射光为489/525nm。
Cas No.:75168-11-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Acridine Orange 10-Nonyl Bromide (NAO), an acridine orange derivative, is a highly specific probe for cardiolipin (CL) and is commonly used to label CL-rich mitochondria[1]. Acridine Orange 10-Nonyl Bromide has been proven to specifically bind CL in vitro and is often used as a live cell stain to measure CL content[2]. In rat cortical astrocytes, neonatal cardiomyocytes, and isolated brain mitochondria, Acridine Orange 10-Nonyl binding to mitochondria was abolished by the mitochondrial uncoupler FCCP, demonstrating labeling of mitochondria by Acridine Orange 10-Nonyl Bromide Staining is highly dependent on membrane potential[2]. Acridine Orange 10-Nonyl has a maximum excitation/emission light of 489/525nm and has been used to quantify cardiolipin content and mitochondrial mass in isolated mitochondria and cellular systems[3].
Acridine Orange 10-Nonyl Bromide（NAO）是一种吖啶橙衍生物，是心磷脂（CL）的高度特异性探针，常用于标记富含CL的线粒体[1]。Acridine Orange 10-Nonyl Bromide已被证明在体外特异性结合CL，并常被用作活细胞染色测定CL含量[2]。在大鼠皮质星形胶质细胞、新生儿心肌细胞和分离的脑线粒体中，Acridine Orange 10-Nonyl与线粒体的结合被线粒体解偶联剂FCCP消除，表明Acridine Orange 10-Nonyl Bromide对线粒体的标记染色对膜电位具有高度依赖性[2]。Acridine Orange 10-Nonyl的最大激发光/发射光为489/525nm，并已用于定量分离的线粒体和细胞系统中的心磷脂含量和线粒体质量[3]。
References:
[1].Myriam E Rodriguez,et.Targeting of mitochondria by 10-N-alkyl acridine orange analogues: role of alkyl chain length in determining cellular uptake and localization. 2008 Jun;8(3):237-46. doi: 10.1016/j.mito.2008.04.003. Epub 2008 Apr 25.
[2].Jake Jacobson, Michael R Duchen, Simon J R Heales. Intracellular distribution of the fluorescent dye nonyl acridine orange responds to the mitochondrial membrane potential: implications for assays of cardiolipin and mitochondrial mass. 2002 Jul;82(2):224-33. doi: 10.1046/j.1471-4159.2002.00945.x.
[3]. M H Ratinaud, P Leprat, R Julien. In situ flow cytometric analysis of nonyl acridine orange-stained mitochondria from splenocytes. 1988 May;9(3):206-12. doi: 10.1002/cyto.990090304.
本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。
1、制备Acridine Orange 10-Nonyl Bromide染色液
（1）染料储存液:使用DMSO将Acridine Orange 10-Nonyl Bromide（NAO）溶解成1-5mM的储存液。
注意:未使用的储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存（在氮气下储存），避免反复冻融。
（2）染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为20nM~1μM的染料工作液。
注意:
①由于NAO的使用浓度比较低，建议使用DMSO稀释储存液，配制一个中间储存浓度(比如:100μM)；
②请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL经37 °C预热的染料工作液重悬细胞，37 °C避光孵育15-30min分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100uL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，37 °C避光孵育15-30min分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。
4、显微镜检测：Acridine Orange 10-Nonyl Bromide的最大激发光/发射光为489/525nm。注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. M H Ratinaud, P Leprat, R Julien. In situ flow cytometric analysis of nonyl acridine orange-stained mitochondria from splenocytes. 1988 May;9(3):206-12. doi: 10.1002/cyto.990090304.
| Cas No. | 75168-11-5 | SDF | |
| 别名 | 10-壬基溴代吖啶橙; Nonylacridine orange | ||
| Canonical SMILES | CCCCCCCCC[N+]1=C2C=C(N(C)C)C=CC2=CC3=C1C=C(N(C)C)C=C3.[Br-] | ||
| 分子式 | C26H38BrN3 | 分子量 | 472.5 |
| 溶解度 | DMSO : 25 mg/mL (52.91 mM) | 储存条件 | Store at 2-8°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.1164 mL | 10.582 mL | 21.164 mL |
| 5 mM | 0.4233 mL | 2.1164 mL | 4.2328 mL |
| 10 mM | 0.2116 mL | 1.0582 mL | 2.1164 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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