Alkyne tyramide
(Synonyms: Alk-Ph) 目录号 : GC60573
Alkyne tyramide是一种可点击的抗坏血酸过氧化物酶2（APEX2）探针，具有水溶性和细胞壁渗透性，可显著提高完整酵母细胞中的APEX标记效率，还有助于识别APEX标记位点，从而可以明确分配线粒体蛋白的膜拓扑结构。
Cas No.:1694495-59-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
;)
,-1-7$$$37316672.jpg');)
;)
;)
$$$36806353.jpg');)
;33(7)%EF%BC%9A546-561$$$37156877.jpg');)
;)
;)
;)
%201124-1138.$$$35908550.jpg');)
%20766-780.$$$37100057.jpg');)
%20418-432.$$$36893736.jpg');)
%EF%BC%9A-240-255.$$$35108512.jpg');)
533-545$$$36543525.jpg');)
%201-13.$$$36600053.jpg');)
;)
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本实验方案来自文献，请根据具体需要进行修改。
1. 酵母菌株转化体在SD细胞培养中生长至对数中期，随后接种到SG细胞培养基或YPG培养基中。收取细胞，用PBS缓冲液洗涤两次。
2. 将细胞沉淀重悬于含2.5mM Alkyne tyramide的PBS缓冲液（约500μL Alkyne tyramide溶液，用于5 OD600个酵母细胞）中，并在室温下孵育30分钟。然后加入H2O2反应1min以触发苯酚自由基的产生和APEX2标记。
3. 加入等体积的淬灭剂溶液（10mM叠氮化钠，10mM抗坏血酸钠和5mM trolox），以停止Alkyne tyramide标记。
4. APEX2标记后，用PBS缓冲液洗涤细胞两次，然后用蛋白酶抑制剂混合物重悬于PBS缓冲液中。
5. 将细胞与等体积玻璃珠混合，并在4°C下以2000rpm振动1分钟。此后，将细胞置于冰上冷却1分钟。重复“摇-冷”循环10次以裂解酵母细胞。通过在-80°C的冷甲醇中沉淀蛋白质3小时来去除多余的小分子。
6. 将蛋白质沉淀重悬于含0.5% SDS的水中，然后在CuSO4（333μM），BTTAA（666μM）和抗坏血酸钠（2.5mM）存在下，用azide-Cy5（100μM）室温反应1小时。标记的蛋白质样品在12% SDS-PAGE凝胶上分离。
7. 对于凝胶内荧光分析，用脱色溶液（60% v/v 水、30% v/v 甲醇、10% v/v 乙酸）冲洗凝胶，然后在Typhoon FLA 9500成像仪上成像。
参考文献:
[1] Li Y, Tian C, Liu K, et al. A clickable APEX probe for proximity-dependent proteomic profiling in yeast[J]. Cell Chemical Biology, 2020, 27(7): 858-865. e8.
Alkyne tyramide is a clickable ascorbate peroxidase 2 (APEX2) probe with water solubility and cell wall permeability that significantly improves APEX labeling efficiency in intact yeast cells and also AIDS in the identification of APEX labeling sites that can clearly assign the membrane topology of mitochondrial proteins[1].
The engineered ascorbate peroxidase (APEX) is a powerful tool for the proximity-dependent labeling of proteins and RNAs in live cells. Alkyne tyramide was identified as a clickable APEX substrate that enables proteomic analysis in the mitochondrial matrix of intact yeast cells with extremely high specificity (94%) and higher coverage than the traditional APEX2 substrate biotin-phenol (BP). Alkyne tyramide labeling is dependent on APEX2 expression and the presence of H2O2, and APEX2-mediated alkyne tyramide labeling of yeast mitochondria is more efficient when the probe concentration is greater than 1mM[1].
References:
[1] Li Y, Tian C, Liu K, et al. A clickable APEX probe for proximity-dependent proteomic profiling in yeast[J]. Cell Chemical Biology, 2020, 27(7): 858-865. e8.
Alkyne tyramide是一种可点击的抗坏血酸过氧化物酶2（APEX2）探针，具有水溶性和细胞壁渗透性，可显著提高完整酵母细胞中的APEX标记效率，还有助于识别APEX标记位点，从而可以明确分配线粒体蛋白的膜拓扑结构[1]。
工程化抗坏血酸过氧化物酶（APEX）是活细胞中蛋白质和RNA邻近依赖性标记的强大工具。Alkyne tyramide被鉴定为可点击的APEX底物，该底物能够以极高的特异性（94%）在完整酵母细胞的线粒体基质中进行蛋白质组学分析，并且比传统的APEX2底物生物素-苯酚（BP）具有更高的覆盖率。Alkyne tyramide标记取决于APEX2表达和H2O2的存在，并且当探针浓度大于1mM时，APEX2介导的酵母线粒体Alkyne tyramide标记更加有效[1]。
| Cas No. | 1694495-59-4 | SDF | |
| 别名 | Alk-Ph | ||
| Canonical SMILES | C#CCCC(NCCC1=CC=C(O)C=C1)=O | ||
| 分子式 | C13H15NO2 | 分子量 | 217.26 |
| 溶解度 | DMSO: 100 mg/mL (460.28 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.6028 mL | 23.0139 mL | 46.0278 mL |
| 5 mM | 0.9206 mL | 4.6028 mL | 9.2056 mL |
| 10 mM | 0.4603 mL | 2.3014 mL | 4.6028 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
A Hybrid Detection Method Based on Peroxidase-mediated Signal Amplification and Click Chemistry for Highly Sensitive Background-free Immunofluorescent Staining
J Histochem Cytochem 2019 Oct;67(10):771-782.PMID:31294668DOI:10.1369/0022155419864113.
The copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) reaction is increasingly used for detection of various macromolecules and metabolites in biological samples. Here, we present a detailed analysis of the CuAAC reaction conditions in cells and tissue sections. Using the optimized CuAAC conditions, we have devised a highly sensitive immunostaining technique, based on the tyramide signal amplification/catalyzed reporter deposition (TSA/CARD) method with a novel Alkyne tyramide substrate. The described method offers improved detection threshold compared to conventional immunofluorescent staining and produces significantly lower non-specific background than TSA/CARD with fluorescent tyramides.