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Anti-HA Magnetic Beads

(Synonyms: Anti-HA 磁珠) 目录号 : GK30006

Anti-HA Magnetic Beads用于对细菌和哺乳动物细胞以及体外表达系统中表达的特定 HA 标记蛋白进行免疫沉淀 (IP)。

Anti-HA Magnetic Beads Chemical Structure

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¥1,305.00
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5ml
¥5,274.00
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Customer Reviews

Based on customer reviews.

Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

Description

Anti-HA Magnetic Beads are used for immunoprecipitation (IP) of specific HA-tagged proteins expressed in bacterial and mammalian cells and in vitro expression systems. Anti-HA magnetic beads are based on hydroxyl magnetic beads, with 200 nm particle size, covalently coupling with high quality mouse IgG3a monoclonal antibody that recognizes the HA-epitope tag (YPYDVPDYA) derived from the human influenza hemagglutinin (HA) protein. Magnetic beads are removed from the solution manually by using a magnetic stand or automatically by using an instrument. With high loading of HA-tagged protein and high specificity, Anti-HA Magnetic Beads are also suitable for Co-immunoprecipitation and purification of HA-tagged protein.

Anti-HA Magnetic Beads用于对细菌和哺乳动物细胞以及体外表达系统中表达的特定 HA 标记蛋白进行免疫沉淀 (IP)。

Anti-HA Magnetic Beads 由高质量的鼠源 IgG3a 单克隆抗体与氨基磁珠共价偶联制备,具有较高的 HA 标签融合蛋白加载容量 ( > 0.6 mg 蛋白 /mL)。本产品可以通过磁力架或自动分离仪器分离,实验便捷有效。本产品蛋白核载量高,特异性强,每500 μL 细胞裂解液推荐使用 10 μL 磁珠,可用于免疫共沉淀 ( Co-IP ) 和小量的蛋白质纯化。

实验参考方法

GK30006








1. 提前准备洗涤缓冲液

洗涤缓冲液

TBST: 50 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.5% Tween-20, pH 7.4

洗脱缓冲液 A

0.15 M Glycine, pH 2.5-3.1

洗脱缓冲液 B

2 mg/mL HA peptide, 50 mM Tris, 150 mM NaCl, pH 7.4

中和缓冲液

1 M Tris-HCl, pH 8.0

2.磁珠预处理
混悬 Anti-HA Magnetic Beads,取 10 μL 磁珠,置于 1.5 mL EP 管中,加入 500 μL 洗涤缓冲液,充分混悬,置于磁力架上磁性分离,弃上清。重复以上洗涤步骤 2 次。
3.样品的结合
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 细胞裂解液,充分混悬,置于翻转混合仪孵育,室温孵育 2 小时或者 4 °C 条件下孵育过夜。置于磁力架上磁性分离,弃上清。
注意:结合过程中,磁珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象,不会影响实验结果。
3.洗涤
在上述分离得到的磁珠中加入 500 μL 洗涤缓冲液,充分混悬磁珠,磁性分离,弃上清。重复以上洗涤步骤 3 次。
4.洗脱
本说明书提供三种 HA 标签蛋白洗脱方案,实验者可以根据后期检测的需要选择不同的洗脱方案。
a. 变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 50 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀 95°C 加热 5 分钟。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,进行 SDS-PAGE 检测。
b. 酸性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 50 μL 的洗脱缓冲液 A 混合均匀,室温孵育 10 分钟。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,按每 50 μL 洗脱液加入 25 μL 中和缓冲液的比例加入中和缓冲液,将洗脱产物 pH 调节至中性,样品用于后期功能分析。
c. 竞争性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有生物活性,可用于后期功能分析。步骤:分离磁珠,弃上清,向磁珠中加入 3-5 倍磁珠体积的洗脱缓冲液B

混合均匀,室温孵育 1 小时或者 4°C 条件下孵育 1-2 小时。分离磁珠,收集上清至新的 EP 管,即为目的蛋白,样品用于后期功能分析。

注意:
1. 本产品 pH 值为 6-8,禁止冷冻保存。
2. 本产品应避免离心、干燥或冻存,禁止长时间置于磁场,可能会引起磁珠聚团,样品结合后操作过程应轻柔,避免抗原脱落。
3. 使用本产品进行 IP 实验前,需先确认样品中 HA 融合蛋白的表达情况。
4. 为最大限度的降低蛋白质降解,请配合使用蛋白酶抑制剂 Cocktail (目录号: GK10014)。
5. 不要使用含 dithiothreitol (DTT) 的细胞裂解液样品,DTT 可能会引起磁珠上的 HA 抗体脱落。
6. 本产品仅用于专业人员的科学研究,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题:
1. 检测结果条带背景过高?
A. 可能是由于蛋白非特异性结合到抗体、磁珠或 EP 管上,建议对裂解液进行预处理,去除非特异结合的蛋白;在最后一次洗涤前,转移整个样品到新的 EP 管中,然后磁性分离或离心分离。
B. 洗涤效果不佳,也会导致条带较高的背景,建议增加洗涤时间与次数。

2. 检测结果无条带?
A. HA 标签蛋白没有表达可能导致检测结果无条带,建议操作:a. 确保目的蛋白带有 HA 标签;b. 制备新鲜的裂解液;c. 使用恰当的蛋白酶抑制剂 ( 目录号:GK10014) 。
B. 孵育时间不足可能导致检测结果无条带,建议延长孵育时间。
C. 裂解液中存在高浓度的 DTT、2-巯基乙醇或其他的还原剂等干扰物质,建议选用合适的裂解液。

产品文档

Quality Control & SDS

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