bis-ANS (potassium salt)
(Synonyms: 4,4'-二苯胺基-1,1'-联萘-5,5'-二磺酸二钾盐,4,4'-Dianilino-1,1'-binaphthyl-5,5'-disulfonic Acid) 目录号 : GC42942一种高亲和力非共价外源荧光染料
Cas No.:65664-81-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、 制备bis-ANS染色液：
（1）配置染料储存液：将bis-ANS溶于DMSO中，配置浓度为5-50mM的储存液。储存液分装后在-20 °C避光保存。
（2）使用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为5-50μM的bis-ANS工作液，使用0.22μm滤膜过滤除菌。
注意：请根据实际情况调整bis-ANS工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-30分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，加入PBS清洗1-2次，并将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-30分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用PBS清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、bis-ANS检测蛋白表面疏水性变化
（1）使用5-50μM的bis-ANS工作液稀释蛋白，至蛋白终浓度为5-10μM。请根据具体实验需求选定合适的染料工作浓度。
（2）使用荧光分光光度计记录400-600 nm处的发射光谱，减去缓冲液中游离bis-ANS的荧光信号。
5、显微镜检测：使用光学显微镜或流式细胞仪对染色细胞进行检测，bis-ANS的最大激发光为390 nm。溶液中游离bis-ANS的最大发射光为523 nm，但与蛋白结合后发生蓝移，荧光强度增加，最大发射光转移至484-496 nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
bis-ANS是一种用于分析蛋白质构象的高亲和力非共价外源荧光染料。[1]它与蛋白质的主要相互作用是通过其疏水的苯环和萘环。[2] bis-ANS具有390 nm的最大激发。[3]当在溶液中游离时，它具有523 nm的最大发射，但是当与蛋白质结合时，随着荧光强度的增加而经历蓝移；例如，当与肠脂肪酸结合蛋白(FAPB2)结合时，它具有484-496 nm的最大发射。bis-ANS已被用于标记急性脑切片中机械损伤的神经元。4它还能有效抑制微管装配。[5],[6]
Reference:
[1]. Hawe, A., Sutter, M., and Jiskoot, W. Extrinsic fluorescent dyes as tools for protein characterization. Pharm. Res. 25(7), 1487-1499 (2008).
[2]. Bothra, A., Bhattacharyya, A., Mukhopadhyay, C., et al. A fluorescence spectroscopic and molecular dynamics study of bis-ANS/protein interaction. J. Biomol. Struct. Dyn. 15(5), 959-966 (1998).
[3]. Pastukhov, A.V., and Ropson, I.J. Fluorescent dyes as probes to study lipid-binding proteins. Proteins 53(3), 607-615 (2003).
[4]. Mozes, E., Hunya, A., Toth, A., et al. A novel application of the fluorescent dye bis-ANS for labeling neurons in acute brain slices. Brain Res. Bull. 86(3-4), 217-221 (2011).
[5]. Horowitz, P., Prasad, V., and Luduena, R.F. Bis(1,8-anilinonaphthalenesulfonate). A novel and potent inhibitor of microtubule assembly. J. Biol. Chem. 259(23), 14647-14650 (1984).
[6]. Mazumdar, M., Parrack, P.K., Mukhupadbhyay, K., et al. Bis-ANS as a specific inhibitor for microtubule-associated protein induced assembly of tubulin. Biochemistry 31(28), 6470-6474 (1992).
| Cas No. | 65664-81-5 | SDF | |
| 别名 | 4,4'-二苯胺基-1,1'-联萘-5,5'-二磺酸二钾盐,4,4'-Dianilino-1,1'-binaphthyl-5,5'-disulfonic Acid | ||
| 化学名 | 4,4'-bis(phenylamino)-[1,1'-binaphthalene]-5,5'-disulfonic acid, dipotassium salt | ||
| Canonical SMILES | [O-]S(C1=CC=CC2=C1C(NC3=CC=CC=C3)=CC=C2C4=C(C=CC=C5S([O-])(=O)=O)C5=C(NC6=CC=CC=C6)C=C4)(=O)=O.[K+].[K+] | ||
| 分子式 | C32H22N2O6S2•2K | 分子量 | 672.9 |
| 溶解度 | 30 mg/ml in DMSO, 30 mg/ml in DMF, Slightly soluble in Ethanol | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4861 mL | 7.4305 mL | 14.861 mL |
| 5 mM | 0.2972 mL | 1.4861 mL | 2.9722 mL |
| 10 mM | 0.1486 mL | 0.7431 mL | 1.4861 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。