Boc-LRR-AMC
(Synonyms: Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin) 目录号 : GC42958
Boc-LRR-AMC是胰蛋白酶体的荧光底物，与20S蛋白酶体类似。
Cas No.:109358-46-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Boc-LRR-AMC is a fluorescent substrate for Trypsin, similar to the 20S proteasome. Boc-LRR-AMC can be used to detect Trypsin-like activity in the 26S proteasome or 20S proteasome core. The detection wavelength of Boc-LRR-AMC is 380nm/460nm[1].
References:
[1]. Gruba N, Wysocka M, Brzezińska M, et al. Bladder cancer detection using a peptide substrate of the 20S proteasome[J]. The FEBS journal, 2016, 283(15): 2929-2948.
Boc-LRR-AMC是胰蛋白酶体的荧光底物，与20S蛋白酶体类似。可用于检测26S蛋白酶体或20S蛋白酶体核心的胰蛋白酶样活性。Boc-LRR-AMC检测波长为380nm/460nm[1]。
用于捕获蛋白酶体检测的CAPA（CAPA for capture proteasome assay）（来自文献，请根据您的需要进行修改）[1][2]。
1. 抗体包被：准备5μg/ml目的抗体包被黑色96孔maxisorp板，然后使用含有2% BSA的PBS进一步封闭1小时。
2. 蛋白酶体捕获：将细胞沉淀在PBS中洗涤，并在裂解缓冲液（50mM Tris, 0.1% NP40, pH 7.5）中以107个细胞/ml的细胞密度在冰上裂解。收集上清液，使用BCA蛋白质测定试剂进行分析，并在裂解缓冲液中将蛋白质含量调节至200μg/ml的浓度。然后在每个孔中加入50μl细胞裂解物，并将板在4°C下孵育2小时。使用定量ELISA检测在这些条件下捕获的蛋白酶体量调整至每孔约200ng[3]。
3. 底物孵育：捕获蛋白酶体后，首先使用20mM Tris缓冲液（含0.1% NP40，pH 7.5）小心洗涤板，在使用20mM Tris缓冲液（pH 7.5）洗涤，以去除多余物质。然后将在20mM Tris缓冲液（pH 7.5）中稀释的蛋白酶体抑制剂加入孔中，并在室温下旋转孵育10分钟。最后，将荧光底Boc-LRR-AMC稀释于20mM Tris缓冲液中，以100μM的浓度加入孔中。
4. 荧光检测：用塑料盖密封板，在37°C下孵育约30分钟。然后使用蛋白酶体-GloMAX或 SpectraMax 190酶标仪在激发波长380nm，发射波长460nm条件下测量荧光值。
References:
[1]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay (CAPA) to evaluate subtype-specific proteasome inhibitors[J]. Data in Brief, 2015, 4: 146-151.
[2]. Vigneron N, Abi Habib J, Van den Eynde B J. The capture proteasome assay: a method to measure proteasome activity in vitro[J]. Analytical biochemistry, 2015, 482: 7-15.
[3]. Guillaume B, Chapiro J, Stroobant V, et al. Two abundant proteasome subtypes that uniquely process some antigens presented by HLA class I molecules[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(43): 18599-18604.
| Cas No. | 109358-46-5 | SDF | |
| 别名 | Boc-Leu-Arg-Arg-AMC, Boc-Leu-Arg-Arg-7-amido-4-Methylcoumarin | ||
| Canonical SMILES | O=C1C=C(C)C2=C(C=C(NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CCCNC(N)=N)NC([C@H](CC(C)C)NC(OC(C)(C)C)=O)=O)=O)=O)C=C2)O1 | ||
| 分子式 | C33H52N10O7 | 分子量 | 700.8 |
| 溶解度 | DMF: 14 mg/ml,DMSO: 12 mg/ml,Ethanol: 10 mg/ml,PBS (pH 7.2): 1 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4269 mL | 7.1347 mL | 14.2694 mL |
| 5 mM | 0.2854 mL | 1.4269 mL | 2.8539 mL |
| 10 mM | 0.1427 mL | 0.7135 mL | 1.4269 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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