C12FDG
(Synonyms: 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside) 目录号 : GC43021
C12FDG是β-半乳糖苷酶的荧光底物。
Cas No.:138777-25-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
C12FDG is the fluorescent substrate of β-galactosidase. By enzymolysis of β-galactosidase, fluorescein is released and its fluorescence can be used to quantify the activity of β-galactosidase. The excitation/emission maxima of fluorescein are 485/530 nm[1-3].
C12FDG(15 μM ; 2 h) staining can assess SA-β-Gal activity to detect senescence in THP-1 cells(15 μM ; 2 h) [4]and A172 cells(90 min; 33 µM) [5]. Live cell measurements of senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal) activity using the fluorescent substrate C12FDG in combination with the determination of the total cell number using a DNA intercalating Hoechst dye opens the possibility to screen for senotherapeutic drugs [6].
References:
[1]. Zhang YZ, Naleway JJ, et,al. Detecting lacZ gene expression in living cells with new lipophilic, fluorogenic beta-galactosidase substrates. FASEB J. 1991 Dec;5(15):3108-13. doi: 10.1096/fasebj.5.15.1720751. PMID: 1720751.
[2]. Plovins A, Alvarez AM, et,al. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells. Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41. doi: 10.1128/aem.60.12.4638-4641.1994. PMID: 7811104; PMCID: PMC202038.
[3]. Fuhrmann-Stroissnigg H, Santiago FE, et,al. SA-β-Galactosidase-Based Screening Assay for the Identification of Senotherapeutic Drugs. J Vis Exp. 2019 Jun 28;(148). doi: 10.3791/58133. PMID: 31305507.
[4]. Díaz M, Pibuel M, et,al. 4-Methylumbelliferone induces antitumor effects independently of hyaluronan synthesis inhibition in human acute leukemia cell lines. Life Sci. 2021 Dec 15;287:120065. doi: 10.1016/j.lfs.2021.120065. Epub 2021 Oct 19. PMID: 34678263.
[5]. Beltzig L, Frumkina A, et,al. Cytotoxic, Genotoxic and Senolytic Potential of Native and Micellar Curcumin. Nutrients. 2021 Jul 13;13(7):2385. doi: 10.3390/nu13072385. PMID: 34371895; PMCID: PMC8308652.
[6].Waltz RA, Whitney KE, et,al. A Systemic and Local Comparison of Senescence in an Acute Anterior Cruciate Ligament Injury-A Pilot Case Series. Life (Basel). 2023 Jul 15;13(7):1567. doi: 10.3390/life13071567. PMID: 37511942; PMCID: PMC10381817.
C12FDG是β-半乳糖苷酶的荧光底物。通过酶解β-半乳糖苷酶释放荧光素，荧光素的荧光可以用来定量测定β-半乳糖苷酶的活性。荧光素的激发/发射最大值为485/530 nm[1-3]。
C12FDG (15 μm;2 h)染色可评估SA-β-Gal活性，检测THP-1细胞(15 μM;2 h) [4]和A172细胞(90 min;33μM) [5]。使用荧光底物C12FDG测量衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性，结合使用DNA插入Hoechst染料测定细胞总数，为筛选老年治疗药物提供了可能[6]。
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荧光老化相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)实验 [1]: |
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1. 培养细胞，密度为105个/mL . 2. 用200 μL PBS洗涤细胞1次，然后用100 μL固定液(2%甲醛/0.2%戊二醛蒸馏水)在室温下固定5分钟。 3. 用200 μL PBS洗涤细胞2次，用100 μL 33 μM C12FDG (PBS,pH=6.0)染色10 min，再用200 μL Hoechst溶液(1 μg/mL Hoechst 33342)在PBS(pH 6.0)上染色10 min。 4. 用20倍物镜和360 nm (Hoechst 33342)和480 nm (C12FDG)的激发滤光片对细胞成像，用460 nm和535 nm的发射滤光片对细胞进行监测。 仅供参考，应根据您的实验具体需要进行修改。 |
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用C12FDG测定衰老相关β-半乳糖苷酶活性 [2]: |
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采用荧光细胞透性底物C12FDG，流式细胞术检测内皮细胞衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)。
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References: [1]. Udono M, Kadooka K, et,al. Quantitative analysis of cellular senescence phenotypes using an imaging cytometer. Methods. 2012 Mar;56(3):383-8. doi: 10.1016/j.ymeth.2012.02.012. Epub 2012 Mar 3. PMID: 22406489. [2]. Qureshi AW, Altamimy R, et,al. Ageing enhances the shedding of splenocyte microvesicles with endothelial pro-senescent effect that is prevented by a short-term intake of omega-3 PUFA EPA:DHA 6:1. Biochem Pharmacol. 2020 Mar;173:113734. doi: 10.1016/j.bcp.2019.113734. Epub 2019 Dec 5. PMID: 31811867. |
| Cas No. | 138777-25-0 | SDF | |
| 别名 | 5-Dodecanoylaminofluorescein di-β-D-Galactopyranoside | ||
| 化学名 | N-[3',6'-bis(β-D-galactopyranosyloxy)-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-5-yl]-dodecanamide | ||
| Canonical SMILES | O[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@H](O)[C@@H]1OC2=CC=C(C3(C4=CC=C(NC(CCCCCCCCCCC)=O)C=C4C(O3)=O)C(C=CC(O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)=C6)=C6O7)C7=C2 | ||
| 分子式 | C44H55NO16 | 分子量 | 853.9 |
| 溶解度 | DMSO : 50 mg/mL (58.55 mM; Need ultrasonic) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1711 mL | 5.8555 mL | 11.711 mL |
| 5 mM | 0.2342 mL | 1.1711 mL | 2.3422 mL |
| 10 mM | 0.1171 mL | 0.5855 mL | 1.1711 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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