C6 NBD Ceramide (d18:1/6:0)
(Synonyms: C6 NBD Ceramide, NBD Cer(18:1/2:0), NBD Ceramide (d18:1/6:0) , N-C6-NBD-D-erythro-Sphingosine) 目录号 : GC43096A biologically active, fluorescent analog of ceramide
Cas No.:94885-02-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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C6 NBD ceramide is a biologically active fluorescent analog of short chain, membrane-permeable ceramides.1 It is as effective as C6 ceramide in the inhibition of viral glycoprotein transport through the Golgi.[1] C6 NBD ceramide has been used as a fluorescent substrate for the activity of UDP-glucose:ceramide glucosyltransferase and to demonstrate the translocation of glucocerebroside and sphingomyelin from the Golgi to the plasma membrane.[2],[3]
Reference:
[1]. Rosenwald, A.G., and Pagano, R.E. Inhibition of glycoprotein traffic through the secretory pathway by ceramide. J. Biol. Chem. 268(7), 4577-4579 (1993).
[2]. Paul, P., Kamisaka, Y., Marks, D.L., et al. Purification and characterization of UDP-glucose: Ceramide glucosyltransferase from rat liver Golgi membranes. J. Biol. Chem. 271(4), 2287-2293 (1996).
[3]. Lipsky, N.G., and Pagano, R.E. Intracellular translocation of fluorescent sphingolipids in cultured fibroblasts: Endogenously synthesized sphingomyelin and glucocerebroside analogues pass through the golgi apparatus en route to the plasma membrane. J. Cell. Biol. 100(1), 27-34 (1985).
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1) 配置储存液: 将低温保存的C6 NBD Ceramide从冰箱取出，室温静置恢复至室温。低速离心，将粉末集中在试管底部。向管中添加无水DMSO溶解粉末，制备浓度为5-10 mM的储存液。
注意:未使用的储存液根据单次用量分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2) 配置工作液: 使用HBSS/HEPES按照1:1000的比例稀释储存液，制备浓度为5-10μM的工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2. 活细胞高尔基体的荧光标记
(1) 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
(2) 从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，去除细胞培养液，用合适的缓冲液（如HBSS/HEPES）洗涤生长在盖玻片上的细胞；
(3) 从盖玻片的一角加入约100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，4℃避光孵育30分钟；
注意：不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4) 吸走染色液，用冰浴预冷的细胞培养基洗涤细胞2-3次，更换为新鲜培养液37℃再孵育30min；
(5) 用新鲜培养液再洗涤一次，随后用荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。
3. 固定细胞高尔基体的荧光标记
(1) 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
(2) 用HMEM冲洗盖玻片上的细胞。然后将细胞固定在戊二醛或多聚甲醛中5-10 min（25℃）；
(3) 使用戊二醛或多聚甲醛室温处理5-10 min，固定细胞；
注意：避免使用去垢剂和甲醇/丙酮固定剂处理细胞。
(4) 在平衡盐溶液（如HCMF）中洗涤固定的细胞；
(5) 将含有盖玻片的培养皿转移至冰水浴中，并与新鲜制备的NaBH4孵育3-5 min（用于戊二醛固定的细胞）；
(6) 使用冰浴预冷的HCMF冲洗细胞2-3次，每次约10分钟；
(7) 恢复至室温，从盖玻片的一角加入约100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育60 min；
(8) 弃去染色液，使用HCMF清洗固定的细胞，并与10%胎牛血清或2 mg/mL BSA孵育（30-90min; 25℃（室温）），以从制备液中反交换过量的C6 NBD Ceramide，并增强高尔基体的染色。
4.显微镜检测：C6 NBD Ceramide的最大吸收光/发射光波长为466/536nm。
注意事项：
① C6 NBD Ceramide适用于固定细胞染色，而BODIPY FL C5-Ceramide（目录号 : GC68793）和BODIPYTR-ceramide不适合。
② 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
③ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1].Pagano RE. A fluorescent derivative of ceramide: physical properties and use in studying the Golgi apparatus of animal cells. Methods Cell Biol. 1989;29:75-85.
| Cas No. | 94885-02-6 | SDF | |
| 别名 | C6 NBD Ceramide, NBD Cer(18:1/2:0), NBD Ceramide (d18:1/6:0) , N-C6-NBD-D-erythro-Sphingosine | ||
| 化学名 | N-[7-(4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole)]-6-aminocaproyl-D-erythro-sphingosine | ||
| Canonical SMILES | CCCCCCCCCCCCC/C=C/[C@@H](O)[C@@H](NC(CCCCCN(C1=CC=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C12)[H])=O)CO | ||
| 分子式 | C30H49N5O6 | 分子量 | 575.7 |
| 溶解度 | 5mg/mL in ethanol; 10mg/mL in DMSO; 25mg/mL in DMF | 储存条件 | Store at -20°C; protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.737 mL | 8.6851 mL | 17.3702 mL |
| 5 mM | 0.3474 mL | 1.737 mL | 3.474 mL |
| 10 mM | 0.1737 mL | 0.8685 mL | 1.737 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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