Coelenterazine 400a
(Synonyms: 腔肠素400A,Bisdeoxycoelenterazine) 目录号 : GC43290Coelenterazine 400a是一种天然腔肠素的衍生物，作为海肾荧光素酶（Rluc）的底物，其最大发射波长约为400nm。
Cas No.:70217-82-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Coelenterazine 400a, a derivative of natural coelenterazine[1], functions as a substrate for Renilla luciferase (Rluc)[2], with a maximum emission wavelength of 400nm. In the presence of Rluc, Coelenterazine 400a reacts with molecular oxygen, forming high-energy intermediates and emitting light as a result[3][4]. Its minimal interference with fluorescent acceptors makes it an ideal choice for bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assays, commonly used to evaluate protein-protein interactions[5][6].
References:
[1]. Sousa J, Magalhães CM, González-Berdullas P, et al. Comparative Investigation of the Chemiluminescent Properties of a Dibrominated Coelenterazine Analog. Int J Mol Sci. 2022 Jul 30;23(15):8490. doi: 10.3390/ijms23158490. PMID: 35955625; PMCID: PMC9369366.
[2]. Markova SV, Vysotski ES. Coelenterazine-dependent luciferases. Biochemistry (Mosc). 2015 Jun;80(6):714-32. doi: 10.1134/S0006297915060073. PMID: 26531017.
[3]. Min CG, Ferreira PJO, Pinto da Silva L. Theoretically obtained insight into the mechanism and dioxetanone species responsible for the singlet chemiexcitation of Coelenterazine. J Photochem Photobiol B. 2017 Sep;174:18-26. doi: 10.1016/j.jphotobiol.2017.07.012. Epub 2017 Jul 20. PMID: 28750319.
[4]. Vacher M, Fdez Galván I, Ding BW, et al. Chemi- and Bioluminescence of Cyclic Peroxides. Chem Rev. 2018 Aug 8;118(15):6927-6974. doi: 10.1021/acs.chemrev.7b00649. Epub 2018 Mar 1. PMID: 29493234.
[5]. Ming-Liang Yuan, Tian-Yu Jiang, Lu-Pei Du, et al. Luminescence of coelenterazine derivatives with C-8 extended electronic conjugation. Chinese Chemical Letters. 2016, 27(04): 550-554 https://doi.org/10.1016/j.cclet.2016.02.011
[6]. Li J, Wang X, Dong G, et al. Novel furimazine derivatives for nanoluciferase bioluminescence with various C-6 and C-8 substituents. Org Biomol Chem. 2021 Sep 22;19(36):7930-7936. doi: 10.1039/d1ob01098k. PMID: 34549229.
Coelenterazine 400a是一种天然腔肠素的衍生物[1]，作为海肾荧光素酶（Rluc）的底物[2]，其最大发射波长约为400nm。在Rluc的存在下Coelenterazine 400a与分子氧反应，形成高能量的中间产物，并发出光[3][4]。由于其对荧光受体的干扰极小，使其成为生物发光共振能量转移（BRET）实验的理想底物，常用于评估蛋白质-蛋白质相互作用[5][6]。
Coelenterazine 400a在BRET实验中的方案
1.储备液的制备：用100%乙醇或甲醇溶解Coelenterazine 400a，制备浓度为1mM的储备液。储存液分装后在-20℃或-80℃避光保存。
2.样品的制备：在适当的培养基中培养细胞，直到细胞达到70-80%的融合度。使用适当的转染试剂将Renilla荧光素酶和荧光受体质粒共转染到细胞中。转染后，继续培养细胞24-48小时，以确保足够的蛋白质表达。
3.底物溶液的制备：使用细胞培养基将Coelenterazine 400a储备液稀释至100μM的浓度，备用。
4.BRET实验：洗涤转染后的细胞，并将其重悬于磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。将90µL细胞悬液加入白色96孔板中。向每孔中加入10µL底物溶液，使最终浓度达到10µM。
5.荧光测量：加入Coelenterazine 400a后，使用多模式微孔板读数仪测量发光强度。
本方案仅作为参考方案，应根据您的具体实验需求进行修改。
References:
[1]. Bery N, Rabbitts TH. A Cell-based Screening Method Using an Intracellular Antibody for Discovering Small Molecules Targeting Hard-to-drug Proteins. Bio Protoc. 2022 Feb 20;12(4):e4324. doi: 10.21769/BioProtoc.4324. PMID: 35340285; PMCID: PMC8899552.
| Cas No. | 70217-82-2 | SDF | |
| 别名 | 腔肠素400A,Bisdeoxycoelenterazine | ||
| Canonical SMILES | O=C1C(CC2=CC=CC=C2)=NC3=C(CC4=CC=CC=C4)NC(C5=CC=CC=C5)=CN31 | ||
| 分子式 | C26H21N3O | 分子量 | 391.5 |
| 溶解度 | 1mg/mL in DMSO, Ethanol: 0.5 mg/mL, Methanol: 0.5 mg/mL | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5543 mL | 12.7714 mL | 25.5428 mL |
| 5 mM | 0.5109 mL | 2.5543 mL | 5.1086 mL |
| 10 mM | 0.2554 mL | 1.2771 mL | 2.5543 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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