DAF 2DA (DAF-2DA)
(Synonyms: 5,6-Diaminofluorescein diacetat) 目录号 : GC30702
A cell-
Cas No.:205391-02-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
DAF-
1.Kojima, H., Sakurai, K., Kikuchi, K., et al.Development of a fluorescent indicator for nitric oxide based on the fluorescein chromophoreChem. Pharm. Bull. (Tokyo)46(2)373-375(1998) 2.Nakatsubo, N., Kojima, H., Kikuchi, K., et al.Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: DiaminofluoresceinsFEBS Lett.427(2)263-266(1998)
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置储存液:使用DMSO溶解DAF-2DA,配置浓度为1-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存,避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清和酚红的培养基或PBS)稀释储存液,配制浓度为1-10μM的工作液。
注意:
① 请根据实际情况调整工作液浓度,现用现配。
② 酚红会干扰染料产生的荧光信号,请使用不含酚红的培养基配置染料工作液
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞:经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,用PBS清洗两次,每次5分钟。
(2)贴壁细胞:使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入DAF-2DA工作溶液重悬细胞,37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液,使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测:DAF-2DA的最大激发/发射波长为485/538nm。
注意事项:
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Sanjoy Roychowdhury,et al. Oxidative stress in glial cultures: detection by DAF-2 fluorescence used as a tool to measure peroxynitrite rather than nitric oxide. 2002 Apr 15;38(2):103-14. doi: 10.1002/glia.10024.
Cas No. | 205391-02-2 | SDF | |
别名 | 5,6-Diaminofluorescein diacetat | ||
Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C=C3)C5=C1C=C(N)C(N)=C5 | ||
分子式 | C24H18N2O7 | 分子量 | 446.41 |
溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 2.2401 mL | 11.2005 mL | 22.4009 mL |
5 mM | 0.448 mL | 2.2401 mL | 4.4802 mL |
10 mM | 0.224 mL | 1.12 mL | 2.2401 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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