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DAF 2DA (DAF-2DA) Sale

(Synonyms: 5,6-Diaminofluorescein diacetat) 目录号 : GC30702

A cell-permeable fluorescent probe for NO

DAF 2DA (DAF-2DA) Chemical Structure

Cas No.:205391-02-2

规格 价格 库存 购买数量
100µg
¥756.00
现货
250µg
¥1,652.00
现货
500µg
¥3,136.00
现货
1mg
¥5,880.00
现货

电话:400-920-5774 Email: sales@glpbio.cn

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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Description

DAF-2 diacetate is a sensitive fluorescent indicator for the detection and bioimaging of nitric oxide (NO).1,2 It is a cell-permeable derivative of DAF-2. Upon entry into the cell, DAF-2 diacetate is transformed into the less cell-permeable DAF-2 by cellular esterases thus preventing loss of signal due to diffusion of the molecule from the cell. In the presence of oxygen, DAF-2 reacts with NO to yield the highly fluorescent triazolofluorescein (DAF-2T). Fluorescence is monitored using excitation and emission wavelengths of 485 and 538 nm, respectively.2 At neutral pH the detection limit for NO is 2-5 nM. DAF-2 diacetate can be utilized in cells which produce small amounts of NO, such as endothelial cells, as well as in cells which generate large amount of NO, such as macrophages.1,2

1.Kojima, H., Sakurai, K., Kikuchi, K., et al.Development of a fluorescent indicator for nitric oxide based on the fluorescein chromophoreChem. Pharm. Bull. (Tokyo)46(2)373-375(1998) 2.Nakatsubo, N., Kojima, H., Kikuchi, K., et al.Direct evidence of nitric oxide production from bovine aortic endothelial cells using new fluorescence indicators: DiaminofluoresceinsFEBS Lett.427(2)263-266(1998)

实验参考方法

本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。

1.制备染色液

(1)配置储存液:使用DMSO溶解DAF-2DA,配置浓度为1-10mM的储存液。

注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存,避免反复冻融。

(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清和酚红的培养基或PBS)稀释储存液,配制浓度为1-10μM的工作液。

注意:

①  请根据实际情况调整工作液浓度,现用现配。

②  酚红会干扰染料产生的荧光信号,请使用不含酚红的培养基配置染料工作液

 

2.细胞悬浮染色

(1)悬浮细胞:经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,用PBS清洗两次,每次5分钟。

(2)贴壁细胞:使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。

(3)加入DAF-2DA工作溶液重悬细胞,37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。

(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。

(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞术观察。

 

3.细胞贴壁染色

(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。

(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

(4) 37 °C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。

(5)孵育结束后吸弃染料工作液,使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。

 

4.显微镜检测:DAF-2DA的最大激发/发射波长为485/538nm。

 

注意事项:

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

References:

[1]. Sanjoy Roychowdhury,et al. Oxidative stress in glial cultures: detection by DAF-2 fluorescence used as a tool to measure peroxynitrite rather than nitric oxide. 2002 Apr 15;38(2):103-14. doi: 10.1002/glia.10024.

化学性质

Cas No. 205391-02-2 SDF
别名 5,6-Diaminofluorescein diacetat
Canonical SMILES O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C=C3)C5=C1C=C(N)C(N)=C5
分子式 C24H18N2O7 分子量 446.41
溶解度 Soluble in DMSO 储存条件 Store at -20°C
General tips 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。

溶解性数据

制备储备液
1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.2401 mL 11.2005 mL 22.4009 mL
5 mM 0.448 mL 2.2401 mL 4.4802 mL
10 mM 0.224 mL 1.12 mL 2.2401 mL
  • 摩尔浓度计算器

  • 稀释计算器

  • 分子量计算器

质量
=
浓度
x
体积
x
分子量
 
 
 
*在配置溶液时,请务必参考产品标签上、MSDS / COA(可在Glpbio的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。

计算

动物体内配方计算器 (澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
给药剂量 mg/kg 动物平均体重 g 每只动物给药体积 ul 动物数量
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方)
% DMSO % % Tween 80 % saline
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