DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)
(Synonyms: Diaminofluorescein-FM diacetate) 目录号 : GC33465DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)是一种细胞渗透性荧光探针，用于一氧化氮（NO）的检测和生物成像，DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)探针可量化细胞中的一氧化氮（NO）水平，最大激发/发射波长为495/515nm。
Cas No.:254109-22-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) is a cell-permeable fluorescent probe used for the detection and bioimaging of nitric oxide (NO). The DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) probe can quantify the level of nitric oxide (NO) in cells, with a maximum excitation/emission wavelength of 495/515nm[1-2].
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) can permeate the cell membrane of living cells and is deacetylated by intracellular esterases to become DAF-FM. DAF-FM can react with NO produced in cells to form highly fluorescent triazole fluorescein (DAF-FMT), which can be located and monitored by fluorescence or confocal microscopy, or detected by fluorescence assay and flow cytometry. The NO detection limit of DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) is approximately 3nM[1-3]. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) can be used as a vital dye for zebrafish embryos to mark the early ossification centers of developing zebrafish[4]. DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) can be used to detect the production of NO in fungi[5].
References:
[1] Kojima, H., Urano, Y., Kikuchi, K., et al.Fluorescent indicators for imaging nitric oxide productionAngew. Chem. Int. Ed. Engl.38(21)3209-3212(1999)
[2] Kojima, H., Nakatsubo, N., Kikuchi, J., et al.Detection and imaging of nitric oxide with novel fluorescent indicators: DiaminofluoresceinsAnal. Chem.70(13)2446-2453(1998)
[3] Kumari A, Bhatoee M, Singh P, et al. Detection of nitric oxide from chickpea using DAF fluorescence and chemiluminescence methods[J]. Current Protocols, 2022, 2(4): e420.
[4] Huysseune A, Larsen U G, Larionova D, et al. Bone formation in zebrafish: the significance of DAF-FM DA staining for nitric oxide detection[J]. Biomolecules, 2023, 13(12): 1780.
[5] Oiki S, Nasuno R, Urayama S, et al. Intracellular production of reactive oxygen species and a DAF-FM-related compound in Aspergillus fumigatus in response to antifungal agent exposure[J]. Scientific Reports, 2022, 12(1): 13516.
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)是一种细胞渗透性荧光探针，用于一氧化氮（NO）的检测和生物成像，DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)探针可量化细胞中的一氧化氮（NO）水平，最大激发/发射波长为495/515nm[1-2]。
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)可渗透活细胞的细胞膜，在细胞内被细胞内酯酶脱乙酰化，成为DAF-FM，DAF-FM可与细胞内产生的NO发生反应，形成高荧光三唑荧光素（DAF-FMT），可以通过荧光或共聚焦显微镜进行定位和监测，也可以通过荧光测定法和流式细胞术进行检测。DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)的NO检测限约为3nM[1-3]。DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)可作为斑马鱼胚胎的活体染料，用于标记发育中的斑马鱼早期骨化中心[4]。DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)可用于检测真菌中NO的产生[5]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置储存液：将冷冻保存的产品室温放置融化，经短暂离心将粉末集中在底部。使用无水DMSO溶解DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)，配置浓度为1-10mM的储存液。
注意：未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
(2)使用合适的缓冲液（如:无血清和酚红的培养基或PBS）稀释储存液，配制浓度为1-10μM的工作液。
注意：
①请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
②酚红会干扰染料产生的荧光信号，请使用不含酚红的培养基配置染料工作液。
2.细胞悬浮染色（六孔板为例）
(1)悬浮细胞：经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)工作溶液重悬细胞，37°C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37°C避光孵育0.5-1h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2-3次。
4.显微镜检测：DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate)的最大激发/发射波长为495/515nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
参考文献:
[1] Chris D St Laurent,Tae Chul Moon,A Dean Befus. Measurement of nitric oxide in mast cells with the fluorescent indicator DAF-FM diacetate. 2015:1220:339-45. doi: 10.1007/978-1-4939-1568-2_21.
| Cas No. | 254109-22-3 | SDF | |
| 别名 | Diaminofluorescein-FM diacetate | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=C(F)C(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C(F)=C3)C5=C1C(N)=C(NC)C=C5 | ||
| 分子式 | C25H18F2N2O7 | 分子量 | 496.42 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0144 mL | 10.0721 mL | 20.1442 mL |
| 5 mM | 0.4029 mL | 2.0144 mL | 4.0288 mL |
| 10 mM | 0.2014 mL | 1.0072 mL | 2.0144 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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