DDAO
(Synonyms: 1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮) 目录号 : GC61840
DDAO是一种近红外（NIR）红色荧光探针，具有可调激发波长（600-650nm）和长发射波长（λem=656nm）和相对较低的pKa（~5）。
Cas No.:118290-05-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DDAO is a near-infrared (NIR) red fluorescent probe with tunable excitation wavelength (600-650nm) and long emission wavelength (λem=656nm) and a relatively low pKa (~5)[1]. DDAO can be used to detect the activities of different enzymes, such as β-galactosidase, sulfatase, protein phosphatase 2A, carboxylesterase 2, human albumin, and esterase. There is a linear relationship between protein phosphatase 2A (PP-2A) concentration and DDAO-induced fluorescence[2]. DDAO can be used to study the phagocytosis of cancer cells by macrophages[3]. DDAO can be used to study the proliferation of B cells[4].
References:
[1] Hou J, Qian M, Zhao H, et al. A near-infrared ratiometric/turn-on fluorescent probe for in vivo imaging of hydrogen peroxide in a murine model of acute inflammation[J]. Analytica Chimica Acta, 2018, 1024: 169-176.
[2] Leira F, Vieites J M, Vieytes M R, et al. Characterization of 9H-(1, 3-dichlor-9, 9-dimethylacridin-2-ona-7-yl)-phosphate (DDAO) as substrate of PP-2A in a fluorimetric microplate assay for diarrhetic shellfish toxins (DSP)[J]. Toxicon, 2000, 38(12): 1833-1844.
[3] Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[4] Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
DDAO是一种近红外（NIR）红色荧光探针，具有可调激发波长（600-650nm）和长发射波长（λem=656nm）和相对较低的pKa（~5）[1]。 DDAO能够用于检测不同酶的活性，例如β-半乳糖苷酶、硫酸酯酶、蛋白磷酸酶2A、羧酸酯酶2、人白蛋白和酯酶。 蛋白磷酸酶2A（PP-2A）浓度与DDAO诱导的荧光之间存在线性关系[2]。DDAO能够用于研究巨噬细胞对癌细胞的吞噬作用[3]。DDAO能够用于研究B细胞的增殖[4]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
(1)储存液：用DMSO溶解DDAO，配置浓度为5mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
(2)工作液：正式实验前，用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，到所需的工作浓度，如:1μM。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. 采用DDAO研究巨噬细胞对癌细胞的吞噬作用[1](来自文献,仅做参考)
(1) 将0.8×106 RAW264.5细胞或1×106 THP1细胞接种到6孔板上。
(2) 孵育24h后，用0.1μg/mL脂多糖（LPS）处理24h以激活RAW264.7细胞。用40nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA）处理48h，使THP1细胞分化。
(3) 活化的巨噬细胞在培养基中用最终浓度为40nM的DiO（货号：GC19515）染色20min，然后用培养基冲洗3次。
(4) 在37°C的PBS中用1μM DDAO（5mM原液，DMSO，储存于−20°C）标记癌细胞15min，然后用含1% FBS的PBS洗涤。
(5) 将DDAO标记的靶细胞（1×106）添加到DiO染色的巨噬细胞（Mφ）中，并在37°C下以2mL的最终体积孵育2h。
(6)孵育后，用EDTA-PBS洗涤3次，然后用0.25%胰蛋白酶消化，收获Mφ和靶细胞。
(7)通过流式细胞术评估双标记细胞（DIO+/DDAO+），代表成熟Mφ吞噬的癌细胞。
3.采用DDAO研究B细胞增殖[2](来自文献,仅做参考)
(1) 用1μM DDAO标记B细胞，并在补充4μg/mL CD40L、100ng/mL BAFF、1μg/mL抗IgM或2.5μg/mL CpG的全RPMI中培养。
(2) 培养3天，通过流式细胞术检测DDAO稀释度（以及CRISPR靶向B细胞中的mCherry表达）。
References:
[1]Candas-Green D, Xie B, Huang J, et al. Dual blockade of CD47 and HER2 eliminates radioresistant breast cancer cells[J]. Nature communications, 2020, 11(1): 4591.
[2]Malinova D, Wasim L, Newman R, et al. Endophilin A2 regulates B‐cell endocytosis and is required for germinal center and humoral responses[J]. EMBO reports, 2021, 22(9): e51328.
| Cas No. | 118290-05-4 | SDF | |
| 别名 | 1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮 | ||
| Canonical SMILES | O=C1C(Cl)=C2C(C)(C)C3=C(C=CC(O)=C3)N=C2C=C1Cl | ||
| 分子式 | C15H11Cl2NO2 | 分子量 | 308.16 |
| 溶解度 | DMSO : 10.42 mg/mL (33.81 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2451 mL | 16.2253 mL | 32.4507 mL |
| 5 mM | 0.649 mL | 3.2451 mL | 6.4901 mL |
| 10 mM | 0.3245 mL | 1.6225 mL | 3.2451 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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