Di-8-ANEPPS
目录号 : GC30248
ANEPPS染料是快速响应的膜电位染料。
Cas No.:157134-53-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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ANEPPS dye is a fast-response membrane potential dye.
Di-8-ANEPPS is a naphthyl styryl potential-sensitive fluorescent dye that can be used for non-invasive measurement of transmembrane voltage and responds quickly to changes in membrane potential[1]. Both the fluorescence excitation and emission spectra of Di-8-ANEPPS will change with the change of V m. Di-8-ANEPPS does not emit fluorescence in water, but it will emit strong fluorescence when combined with the lipid bilayer of the cell membrane, and the change of fluorescence intensity is proportional to the change of ΔΦ[2]. Di-8-ANEPPS has been used to detect transmembrane potentials in many types of static/dynamic cells, including nerve cells, endothelial cells, cardiac cells, and skeletal muscle cells.
Di-8-ANEPPS and Di-4-ANEPPS exhibit fairly consistent fluorescence intensity change rates (10% fluorescence change/100mV) in various tissues, cells and model membrane systems. Compared to Di-4-ANEPPS, Di-8-ANEPPS is more lipophilic and less susceptible to cellular internalization due to its sulfonate group, resulting in better retention on the plasma membrane, suitable for long-term membrane Potential research[2]. Di-8-ANEPPS is also more photostable and less toxic than Di-4-ANEPPS.
ANEPPS染料是快速响应的膜电位染料。
Di-8-ANEPPS是一种萘基苯乙烯基电位敏感荧光染料，可用于非侵入性测量跨膜电压，快速响应膜电位变化[1]。随着V m的变化，Di-8-ANEPPS的荧光激发和发射光谱都会发生变化。Di-8-ANEPPS在水中不发出荧光，但与细胞膜的脂质双层结合后会发出强烈荧光，且荧光强度的变化与ΔΦ的变化成正比[2]。Di-8-ANEPPS已被用于检测多种类型的静/动态细胞中的跨膜电位，包括神经细胞、内皮细胞、心脏细胞和骨骼肌细胞等。
Di-8-ANEPPS和Di-4-ANEPPS在各种组织，细胞和模型膜系统中表现出相当一致的荧光强度变化率(10%荧光变化/100mV)。相较于Di-4-ANEPPS，Di-8-ANEPPS更具亲脂性，并且由于具有磺酸盐基团而不容易受到细胞内化的影响，从而更好地保留在细胞质膜上，适合长期膜电位研究[2]。Di-8-ANEPPS 也比 Di-4-ANEPPS 更具有光稳定性和更低的毒性。
References:
[1]. Pucihar G, Kotnik T, and Miklavcic D. Measuring the induced membrane voltage with Di-8-ANEPPSJ. Vis. Exp.2009(33)(2016)
[2]. Manno C, et al. Confocal imaging of transmembrane voltage by SEER of di-8-ANEPPS. J Gen Physiol. 2013 Mar;141(3):371-87.
本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。
1.细胞膜染色液制备
(1) 配置Di-8-ANEPPS储存液:储存液使用乙醇，DMSO或DMF配置，溶解度约为 1mg/mL。例如：向5mg Di-8-ANEPPS染料中添加843μl DMSO，使用超声和加热（60°C）辅助溶解，制备浓度为10mM的Di-8-ANEPPS储备溶液。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为0.5~10μM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2.悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞经4°C、1000-1500rpm离心3-5分钟，弃去上清液。用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)加入1mL的Di-4-ANEPPS工作溶液(终浓度为0.2-2uM)，4°C孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(3)孵育结束后，经1000-1500rpm离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(4)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.贴壁细胞染色
贴壁细胞一般通过将少量的染料储存液加入培养基(终浓度为0.2-2uM)进行标记染色，在4°C避光孵育10分钟。孵育结束后加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
4.组织样本染色
用于灌注标记组织样本的染料浓度为10-50uM，使用灌注液稀释母液。低标记温度(4-20℃)能抑制染料的内化。组织样本在含探针的灌注液中孵育10-20min后使用不含染料的培养基清洗3次。
注意：部分细胞系染料参入效果不理想可以使用多聚糖辅助染料掺入细胞膜。多聚糖和Di-8-ANEPPS染料共同孵育细胞。多聚糖使用DMSO配置成20%储备液，工作浓度为0.05%[1]。
5.神经元细胞逆行标记
特定的神经元群细胞可通过定位压力注射高浓度的染料溶液(10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇)进入神经组织来实现标记[2]。
6. 荧光检测：Di-8-ANEPPS的激发/发射光分别为498/713nm。
注意事项：1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Pucihar G, Kotnik T, and Miklavcic D. Measuring the induced membrane voltage with Di-8-ANEPPSJ. Vis. Exp.2009(33)(2016)
[2]. V S Sokolov, et al. Voltage-sensitive styryl dyes as singlet oxygen targets on the surface of bilayer lipid membrane. 2016 Aug;161:162-9.doi:10.1016/j.jphotobiol. 2016. 05. 016.
| Cas No. | 157134-53-7 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=S(CCC[N+]1=CC=C(/C=C/C2=CC=C3C=C(N(CCCCCCCC)CCCCCCCC)C=CC3=C2)C=C1)([O-])=O | ||
| 分子式 | C36H52N2O3S | 分子量 | 592.87 |
| 溶解度 | DMF: 2 mg/ml,DMSO: 2 mg/ml,Ethanol: 100µ g/ml | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.6867 mL | 8.4336 mL | 16.8671 mL |
| 5 mM | 0.3373 mL | 1.6867 mL | 3.3734 mL |
| 10 mM | 0.1687 mL | 0.8434 mL | 1.6867 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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