Dihydrofluorescein diacetate
(Synonyms: 二氢荧光素二乙酸酯) 目录号 : GC33512
Dihydrofluoresceindiacetate是用于无细胞系统和细胞模型中测量氧化应激的荧光探针。
Cas No.:35340-49-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Dihydrofluorescein diacetate is a fluorimetric probe mainly used for oxidative stress measurements, in both cell-free systems and cellular models.
Dihydrofluorescein diacetate may be a superior fluorescent probe for many cell-based studies. It is a better fluorescent probe for detecting intracellular oxidants because it is more reactive toward specific oxidizing species. Dihydrofluorescein diacetate demonstrates fluorescence of linear structures, consistent with mitochondria, in reoxygenated endothelium[1]. Dihydrofluorescein diacetate is able to detect the presence of ROS in mitochondria. Dihydrofluorescein diacetate fluorescence was sharp and delineated thin filaments which corresponded in all details to TMRM-stained mitochondria. It enters mitochondria and reacts with ROS released in the matrix[2]. Dihydrofluorescein diacetate could be an useful and quantitative method for measuring the oxidative potential of nanoparticle-treated cells[3].
[1]. Hempel SL, et al. Dihydrofluorescein diacetate is superior for detecting intracellular oxidants: comparison with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, 5(and 6)-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, and dihydrorhodamine 123. Free Radic Biol Med. 1999 Jul;27(1-2):146-59. [2]. Diaz G, et al. Mitochondrial localization of reactive oxygen species by dihydrofluorescein probes. Histochem Cell Biol. 2003 Oct;120(4):319-25. [3]. Aranda A, et al. Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) assay: a quantitative method for oxidative stress assessment of nanoparticle-treated cells. Toxicol In Vitro. 2013 Mar;27(2):954-63.
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.染色液的制备
(1)配置储存液:使用DMSO溶解Dihydrofluorescein diacetate，配置浓度为1-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-10μM的工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入Dihydrofluorescein diacetate工作溶液重悬细胞，室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：Dihydrofluorescein diacetate的最大吸收/发射波长为518/616nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Cas No. | 35340-49-9 | SDF | |
| 别名 | 二氢荧光素二乙酸酯 | ||
| Canonical SMILES | O=C(O)C1=CC=CC=C1C2C3=C(OC4=C2C=CC(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C=C3 | ||
| 分子式 | C24H18O7 | 分子量 | 418.4 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 106.5 mg/mL (254.54 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.3901 mL | 11.9503 mL | 23.9006 mL |
| 5 mM | 0.478 mL | 2.3901 mL | 4.7801 mL |
| 10 mM | 0.239 mL | 1.195 mL | 2.3901 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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