DiO
(Synonyms: DiOC18(3); 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate) 目录号 : GC19515
DiO（ 3,3′-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate）是一种亲脂性长链羰花青荧光染料，被广泛用作Di来标记细胞，细胞器，脂质体，病毒和脂蛋白。
Cas No.:34215-57-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。
1. DiO细胞膜染色液制备
(1).配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用DMSO或EtOH配置,浓度1~5mM。
注意:未使用的储存液分装保存在-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2).工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为0.5~5μM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2.悬浮细胞染色
(1).悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液。用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2).加入1mL的DiO工作溶液，室温孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(3).染色细胞试管在1000~1500转离心5分钟。
(4).4°C、400g离心3-4分钟，弃去上清液。倾倒上清液，加入PBS清洗两次，每次5分钟。
(5).用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.粘壁细胞的染色
(1).在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2).从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3).从盖玻片的一角加入100uL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4).室温条件下孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
(5).吸弃染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：DiO的激发/发射光分别为484/501nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
DiO (3,3′-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate) is a lipophilic long-chain carbocyanine fluorescent dye that is widely used as Di to label cells, organelles, liposomes, viruses and lipoproteins. 3,3′-Octadecyloxacarbocyanine perchlorate is a green fluorescent lipophilic tracer that is weakly fluorescent in water but highly fluorescent and comparable when incorporated into membranes Photostability. 3,3′-Octadecyloxacarbocyanine perchlorate is used as a fluorescent marker for living cells and as a lipophilic dye for labeling zebrafish embryos[1].
Long-chain carbocyanines include DiO, DiI, DiD, DiR, and the dialkylaminostyrene dye DiA for labeling membranes and other hydrophobic structures. DiO fluorochrome exhibits pronounced fluorescence, which facilitates multicolor imaging and flow cytometry analysis of living cells[2]. DiO can be used with standard FITC filters.
References:
[1]. Anat Samuel, et al. Six3 regulates optic nerve development via multiple mechanisms. 2016 Jan 29;6:20267. doi: 10.1038/srep20267.
[2]. Bhowmik BB, et al. Photophysical studies of 3,3' dioctadecyloxacarbocyanine dye in model biological membranes and different solvents. Chem Phys Lipids. 2001 Feb;109(2):175-83.
DiO（ 3,3′-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate）是一种亲脂性长链羰花青荧光染料，被广泛用作Di来标记细胞，细胞器，脂质体，病毒和脂蛋白。3，3′-二十八烷基氧杂羰花青高氯酸盐是一种绿色荧光亲脂性示踪剂，在水中荧光较弱，但当掺入膜中时具有高荧光性和相当的光稳定性。3，3′-二十八烷基氧杂羰花青高氯酸盐被用作活细胞的荧光标记物，也被用作斑马鱼胚胎标记的亲脂性染料[1]。
长链羰花青包括DiO、DiI、DiD、DiR以及二烷基氨基苯乙烯染料DiA，用于标记膜和其他疏水结构。DiO荧光染料表现出明显的荧光，有助于活细胞的多色成像和流式细胞术分析[2]。DiO可与标准 FITC滤光片一起使用。
| Cas No. | 34215-57-1 | SDF | |
| 别名 | DiOC18(3); 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate | ||
| Canonical SMILES | O=Cl(=O)([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCCN1C(C=CC=C2)=C2O/C1=C/C=C/C(OC3=C4C=CC=C3)=[N+]4CCCCCCCCCCCCCCCCCC | ||
| 分子式 | C₅₃H₈₅ClN₂O₆ | 分子量 | 881.70 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at 4°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1342 mL | 5.6709 mL | 11.3417 mL |
| 5 mM | 0.2268 mL | 1.1342 mL | 2.2683 mL |
| 10 mM | 0.1134 mL | 0.5671 mL | 1.1342 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。