Diphenyl Blue (Direct Blue 14)
(Synonyms: 台盼蓝; Direct Blue 14) 目录号 : GC30152
Diphenyl Blue(Trypan blue) 是一种细胞活性染料，是鉴定死细胞最常用的染料，用于测试细胞膜完整性和细胞活力
Cas No.:72-57-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Diphenyl Blue (Trypan blue), a cell viability dye, is the most commonly used dye to identify dead cells and is used to test cell membrane integrity and cell viability[1]. Normal living cells have a complete membrane structure, which can repel trypan blue and prevent it from entering the cell; while cells with inactive or incomplete membranes have increased membrane permeability and can be stained blue by trypan blue It is generally considered that the integrity of the cell membrane is lost, that is, the cell is considered to be dead, which is opposite to the effect of neutral red. Therefore, with the help of trypan blue staining, it is very simple and fast to distinguish living cells from dead cells. Trypan blue is one of the most commonly used stains for dead cell identification in tissue and cell culture[1]. Macrophages are able to phagocytose diphenyl blue, so it can be used as a live stain for macrophages[2].
Diphenyl Blue(Trypan blue) 是一种细胞活性染料，是鉴定死细胞最常用的染料，用于测试细胞膜完整性和细胞活力[1]。正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色，通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反，因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一[1]。巨噬细胞能够吞噬二苯蓝，因此它可以用作巨噬细胞的活染色剂[2]。
References:
[1]. B A Avelar-Freitas,et. Trypan blue exclusion assay by flow cytometry. 2014 Apr;47(4):307-15. doi: 10.1590/1414-431X20143437. Epub 2014 Mar 18.
[2]. Daly, M. L., DeRosa, C. A., Kerr, C., Morris, W. A., & Fraser, C. L. (2016). Blue thermally activated delayed fluorescence from a biphenyl difluoroboron β-diketonate. RSC Advances, 6(85), 81631–81635. doi:10.1039/c6ra18374c.
本方案仅提供一个指导，应根据您的具体需要进行修改。
一、二苯蓝(台盼蓝)染液的配制
1.配置二苯蓝(台盼蓝)储存液：将10 mg台盼蓝溶解在100 mL 0.85% Nacl中，得到0.4%台盼蓝储存液。
注意：建议将储备液分装保存在-20℃-80℃避光条件下，并避免重复冻融循环。
2.配置二苯蓝(台盼蓝)工作液：使用无血清细胞培养基或PBS稀释储存液，配制成浓度为0.04%的台盼蓝工作液。
注：请根据实验需求调整台盼蓝工作液浓度，现用现配。
二、细胞染色
1.悬浮细胞：离心收集细胞，加入PBS洗涤两次，每次5分钟。
贴壁细胞：除去培养基，加入胰蛋白酶消化细胞。离心后弃上清，加入PBS 洗涤两次，每次5分钟。
2.加入1mL台盼蓝工作液，室温条件下孵育5分钟。
3.400g、4℃离心3-4分钟，弃去上清，加入PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。
4.用1mL无血清培养基或PBS重悬细胞。通过显微镜计数或显微镜下拍照后计数计算细胞存活率[1]。
细胞存活率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)*100%
三、注意事项:
1.染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使检测结果偏低。
2.染色前染液若有沉淀，需过滤除掉沉淀后再用。
3.有潜在致癌危险，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Warren Strober.Trypan Blue Exclusion Test of Cell Viability. 2015 Nov 2;111:A3.B.1-A3.B.3. doi: 10.1002/0471142735.ima03bs111.
| Cas No. | 72-57-1 | SDF | |
| 别名 | 台盼蓝; Direct Blue 14 | ||
| Canonical SMILES | CC1=CC(C2=CC=C(/N=N/C3=C(S(=O)([O-])=O)C=C4C=C(S(=O)([O-])=O)C=C(N)C4=C3O)C(C)=C2)=CC=C1/N=N/C5=C(S(=O)([O-])=O)C=C6C=C(S(=O)([O-])=O)C=C(N)C6=C5O.[Na+].[Na+].[Na+].[Na+] | ||
| 分子式 | C34H24N6Na4O14S4 | 分子量 | 960.81 |
| 溶解度 | Water : 150 mg/mL (156.12 mM) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.0408 mL | 5.2039 mL | 10.4079 mL |
| 5 mM | 0.2082 mL | 1.0408 mL | 2.0816 mL |
| 10 mM | 0.1041 mL | 0.5204 mL | 1.0408 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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