Disuccinimidyl Suberate
(Synonyms: 双琥珀酰亚胺辛二酸酯,DSS, NSC 340008) 目录号 : GC43480
Disuccinimidyl Suberate是不溶于水的同型双功能的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS-酯)。Disuccinimidyl Suberate不具有带电荷的基团，所以是亲脂性和膜可渗透的，能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭反应。
Cas No.:68528-80-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Disuccinimidyl Suberate is a water-insoluble, homobifunctional N-hydroxysuccinimide ester (NHS ester), Disuccinimidyl Suberate does not possess a charged group and is lipophilic and membrane-permeable, which makes it useful for intracellular and intramembrane conjugations.
NHS esters react efficiently with primary amino groups (-NH2) in pH 7 to 9 buffers to form stable amide bonds. The reaction results in the release of N-hydroxysuccinimide. Proteins, including antibodies, generally have several primary amines in the side chain of lysine (K) residues and the N-terminus of each polypeptide that are available as targets for NHS-ester reagents. Disuccinimidyl Suberate is hydrophobic and dissolved in an organic solvent such as DMSO or DMF then added to the aqueous reaction mixture.
Application:
1. Chemical cross-linking of intracellular proteins prior to cell lysis and immunoprecipitation.
2. “Fix” protein interactions to identify weak or transient protein interactions.
3. Protein cross-linking generates bioconjugates through a single-step reaction.
4. Immobilize proteins to amine-coated surfaces.
References:
[1].Cox G W, Mathieson B J, Giardina S L, et al. Characterization of IL-2 receptor expression and function on murine macrophages[J]. Journal of immunology (Baltimore, Md.: 1950), 1990, 145(6): 1719-1726.
[2].Knoller S, Shpungin S, Pick E. The membrane-associated component of the amphiphile-activated, cytosol-dependent superoxide-forming NADPH oxidase of macrophages is identical to cytochrome b559[J]. Journal of Biological Chemistry, 1991, 266(5): 2795-2804.
[3].Partis M D, Griffiths D G, Roberts G C, et al. Cross-linking of protein by ω-maleimido alkanoyl N-hydroxysuccinimido esters[J]. Journal of Protein Chemistry, 1983, 2: 263-277.
Disuccinimidyl Suberate是不溶于水的同型双功能的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS-酯)。Disuccinimidyl Suberate不具有带电荷的基团，所以是亲脂性和膜可渗透的，能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭反应。
NHS-酯能够与pH7～9缓冲液中的伯氨基(-NH2)有效反应形成稳定的酰胺键，释放N-羟基琥珀酰亚胺。包括抗体在内的蛋白质通常在赖氨酸(K)残基的侧链中具有几个伯胺，并且每种多肽的N末端也可用作NHS-酯试剂的靶标。Disuccinimidyl Suberate是疏水性的，可先溶解在有机溶剂如DMSO或DMF中，然后再加入到水溶剂反应混合物中。
Disuccinimidyl Suberate 实际应用：
1.细胞裂解和免疫沉淀前细胞内蛋白的化学交联；
2.“固定”蛋白相互作用，以便识别较弱或瞬时的蛋白相互作用；
3.蛋白交联通过单步反应生成生物偶联物；
4.将蛋白固定到胺包被的表面上。
以下步骤方法是该产品的示例应用，具体应用可适当优化。
一，蛋白质交联方案
A,实验材料：
1.无水DMSO或DMF，用于溶解Disuccinimidyl Suberate；
2.反应缓冲液：使用pH为7 ~ 9的非胺类缓冲液，如100mM磷酸钠，0.15M NaCl；20mM HEPES；100mM碳酸盐/碳酸氢盐；或50mM硼酸盐。
3.淬火缓冲液：1M Tris•HCl， pH7.5 (可加入1M甘氨酸或赖氨酸)通过透析或凝胶去除未反应的实际
B,操作步骤：
1. 在反应缓冲液中制备蛋白质溶液。
2. 使用前准备交联剂。将Disuccinimidyl Suberate溶于DMSO或DMF中。称量2mg Disuccinimidyl Suberate交联剂于微量离心管中，加入216μL溶剂，使成终浓度为25mM。
3.在蛋白质样品中加入交联剂。如果蛋白质浓度大于5mg/mL，使用10倍摩尔过量的交联剂。对于样品浓度小于 5mg/mL，使用20- 50倍摩尔过量的交联剂。建议使用终浓度为0.25-5mM的交联剂。
4. 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
5. 加入淬灭缓冲液淬灭反应，终浓度为20~50mM Tris，或通过透析/脱盐除去未反应的试剂。
6. 将淬火反应在室温下孵育15分钟。
二，细胞内和细胞外交联反应
交联反应可以在悬浮细胞或培养板上的贴壁细胞上进行。在培养板上时，交联反应主要发生在暴露的细胞表面。因此，交联前，必须充分冲洗细胞表面以去除培养基，否则含胺成分会使反应猝灭。使用浓度高的细胞悬浮液交联效率较高，因为反应中只需添加较少的交联试剂。一般情况下，1-5mM的终浓度的交联试剂是有效的。随着pH值的增加，NHS反应速度加快。因此，下面的例子中pH 为8.0，以便快速完成反应。
A,所需材料：
1.交联剂溶液：在使用前，将Disuccinimidyl Suberate溶解在干燥的DMSO中，使成10-25mM。
2.磷酸盐缓冲盐水(PBS)： 20mM磷酸钠，0.15M NaCl，pH值为8。或使用pH7～9的HEPES，碳酸氢盐/碳酸盐/硼酸盐缓冲液替代。
3. 猝灭溶液:1M Tris, pH 7.5 (Tris或甘氨酸将猝灭反应。)
操作步骤：
1.将细胞悬浮在PBS (pH 8.0)中，约为25×10-6细胞/mL。
2.用冰冷的PBS (pH 8.0)洗涤细胞三次，去除含胺的培养基和蛋白质。对于细胞表面相互作用的研究，在细胞中加入配体，在4℃下孵育1小时。
3.加入Disuccinimidyl Suberate溶液至终浓度为1-5mM。
4.将反应混合物在室温下孵育30分钟。
5.加入猝灭溶液至终浓度为10-20mM Tris，淬灭反应。
6.淬灭反应在室温下进行15分钟。
注意：
1. Disuccinimidyl Suberate对湿度敏感。为了避免湿气凝结到产品上，在打开前必须将小瓶平衡到室温。
2. NHS -酯部分易水解，因此不要制备储存液，实验前现配现用。
3. 交联具有生物活性的蛋白质(如酶、抗体等)在偶联时可能导致活性损失，这可能是由分子构象变化引起的。当交联剂修饰结合底物或抗原中涉及的赖氨酸基团时，也可能发生活性损失。调整试剂与目标物的摩尔比可以改善活性损失。或者使用靶向不同官能团的交联剂。
4. NHS酯的水解是一个竞争性反应，随着ph值的增加而加快。在稀释的蛋白质或肽溶液中更容易发生水解。在浓蛋白溶液中，酰化反应更容易发生。
References:
[1].Partis M D, Griffiths D G, Roberts G C, et al. Cross-linking of protein by ω-maleimido alkanoyl N-hydroxysuccinimido esters[J]. Journal of Protein Chemistry, 1983, 2: 263-277.
| Cas No. | 68528-80-3 | SDF | |
| 别名 | 双琥珀酰亚胺辛二酸酯,DSS, NSC 340008 | ||
| 化学名 | octanedioic acid, 1,8-bis(2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl)ester | ||
| Canonical SMILES | O=C(CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O)ON1C(=O)CCC1=O | ||
| 分子式 | C16H20N2O8 | 分子量 | 368.3 |
| 溶解度 | 10mg/mL in DMSO or DMF | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.7152 mL | 13.5759 mL | 27.1518 mL |
| 5 mM | 0.543 mL | 2.7152 mL | 5.4304 mL |
| 10 mM | 0.2715 mL | 1.3576 mL | 2.7152 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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