Filipin Complex
(Synonyms: 菲律宾菌素复合体) 目录号 : GC18406
菲律宾配合物是一种中性多烯，具有抗真菌活性。
Cas No.:11078-21-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Filipin complex is a neutral polyene,it has antifungal activity.As a fluorescent compound, Filipin complex can be used for sterol imaging in labeled biological structures,Excitation/emission values of the complexes were 338/480 nm[1，4] . Filipin III is the main component of Filipin complex which is composed of four parts[3] . The interaction of Filipin Complex with steroids was found to be related both to the functional group at the 3-position and the aliphatic chain of the steroid[7] .
Cells were pretreated with 1 and 5 g/mL of Filipin Complex for 1 h and infected with IPNV at a MOI of 1 for 1 h. After 12 h of incubation in the presence of the drug, IPNV VP2/VP3 expression was revealed by immunofluorescence. It shows the effect of Filipin Complex on IPNV infection. No effect on viral infection was observed[2] . The Filipin Complex complex can bind various sterols in aqueous solutions and fungal cell membranes, especially 24α-methyl cholesterol, 24α-ethyl cholesterol, and cholesterol, inducing membrane pit formation and leakage of cell contents[5] . The Filipin Complex complex can inhibit cell growth and mitochondrial terminal electron transport in Saccharomyces cerevisiae[6] .
References:
[1]. Castanho MA, Coutinho A, et,al.Absorption and fluorescence spectra of polyene antibiotics in the presence of cholesterol. J Biol Chem. 1992 Jan 5;267(1):204-9. PMID: 1730589
[2]. Levican J, Miranda-Cárdenas C, et,al. Infectious pancreatic necrosis virus enters CHSE-214 cells via macropinocytosis. Sci Rep. 2017 Jun 8;7(1):3068. doi: 10.1038/s41598-017-03036-w. PMID: 28596575; PMCID: PMC5465193.
[3]. Payero TD, Vicente CM, et,al. Functional analysis of filipin tailoring genes from Streptomyces filipinensis reveals alternative routes in filipin III biosynthesis and yields bioactive derivatives. Microb Cell Fact. 2015 Aug 7;14:114. doi: 10.1186/s12934-015-0307-4. PMID: 26246267; PMCID: PMC4527110.
[4]. Kühnl A, Musiol A,et,al.Late Endosomal/Lysosomal Cholesterol Accumulation Is a Host Cell-Protective Mechanism Inhibiting Endosomal Escape of Influenza A Virus. mBio. 2018 Jul 24;9(4):e01345-18. doi: 10.1128/mBio.01345-18. PMID: 30042202; PMCID: PMC6058292.
[5]. Kitajima Y, Sekiya T,et,al. Freeze-fracture ultrastructural alterations induced by filipin, pimaricin, nystatin and amphotericin B in the plasmia membranes of Epidermophyton, Saccharomyces and red complex-induced membrane lesions. Biochim Biophys Acta. 1976 Dec 2;455(2):452-65. doi: 10.1016/0005-2736(76)90317-5. PMID: 793632.
[6]. SHAW PD, ALLAM AM,et,al. EFFECT OF FILIPIN ON THE TERMINAL ELECTRON TRANSPORT SYSTEM OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Biochim Biophys Acta. 1964 Jul 8;89:33-41. doi: 10.1016/0926-6569(64)90098-7. PMID: 14213010.
[7]. Kleinschmidt MG, Chough KS. Effect of filipin on liposomes prepared with different types of steroids. Plant Physiol. 1972 May;49(5):852-6. doi: 10.1104/pp.49.5.852. PMID: 16658060; PMCID: PMC366064.
菲律宾配合物是一种中性多烯，具有抗真菌活性。作为一种荧光化合物，菲律宾配合物可用于标记生物结构中的甾醇成像，配合物的激发/发射值为338/480 nm[1 ，4] . Filipin III是Filipin复合体的主要成分，由四部分组成[3]。发现Filipin Complex与类固醇的相互作用与类固醇3-位官能团和脂肪链有关[7]。
细胞用 1 和 5 g/mL 的菲律宾复合物预处理 1 小时，然后用 MOI 为 1 的 IPNV 感染 1 小时。在药物存在下孵育 12 小时后，通过免疫荧光显示 IPNV VP2/VP3 表达。它显示了 Filipin Complex 对 IPNV 感染的影响。未观察到对病毒感染的影响[2]。 Filipin Complex复合物可结合水溶液和真菌细胞膜中的多种甾醇，尤其是24α-甲基胆固醇、24α-乙基胆固醇和胆固醇，诱导膜凹坑形成和细胞内容物渗漏[5]。 Filipin Complex复合物可抑制酿酒酵母细胞生长和线粒体末端电子传递[6]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 制备染色液
(1)储存液:使用DMSO或无水乙醇溶解Filipin，配置浓度为1-5mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。
(2)工作液:使用合适的缓冲液(如：无血清培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-250μM的染料工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：收集细胞，经1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次约5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗细胞两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入1mL的染料工作溶液重悬约5-10x105个细胞，室温避光孵育15-30分钟。
注意：不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)室温避光孵育15-30分钟。
注意：不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用PBS清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：Filipin的最大激发光/发射光波长为380/430nm。
注意事项：
1． Filipin染料染色后，样品的光漂白非常快，建议染色后立即上机检测。
2． 荧光染料均有淬灭的风险，使用过程中请注意避光。
3． 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Cas No. | 11078-21-0 | SDF | |
| 别名 | 菲律宾菌素复合体 | ||
| Canonical SMILES | N/A | ||
| 分子式 | C35H58O11 (for Filipin III) | 分子量 | 654.8 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 100 mg/mL; Ethanol : 10 mg/mL (ultrasonic and warming and heat to 60°C) | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5272 mL | 7.6359 mL | 15.2718 mL |
| 5 mM | 0.3054 mL | 1.5272 mL | 3.0544 mL |
| 10 mM | 0.1527 mL | 0.7636 mL | 1.5272 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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