Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl
目录号 : GA23623
Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl是一种凝血酶荧光底物，广泛用于检测丝氨酸蛋白酶活性，其激发波长和发射波长分别为380nm和460nm。
Cas No.:117961-27-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl is a fluorescent substrate for thrombin, which is widely used to detect serine protease activity. Its excitation and emission wavelengths are 380nm and 460nm, respectively.
The core structure of Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl contains a fluorescent group 7-amino-4-methylcoumarin (AMC). When the substrate is hydrolyzed by protease, AMC is released, generating a strong fluorescent signal (excitation wavelength 380nm, emission wavelength 460nm). The Gly-Pro-Arg sequence is a specific recognition site for thrombin, so this substrate is highly selective for thrombin and is also suitable for the study of other serine proteases (such as trypsin, kallikrein, etc.). Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl can also be used for high-throughput screening of thrombin inhibitors or for detecting thrombin activity in blood samples to assist in the diagnosis of coagulation abnormalities[1][2].
References:
[1]. Corvo I, Cancela M, Cappetta M, et al. The major cathepsin L secreted by the invasive juvenile Fasciola hepatica prefers proline in the S2 subsite and can cleave collagen[J]. Molecular and biochemical parasitology, 2009, 167(1): 41-47.
[2]. Wirsching F, Luge C, Schwienhorst A. Modular design of a novel chimeric protein with combined thrombin inhibitory activity and plasminogen-activating potential[J]. Molecular genetics and metabolism, 2002, 75(3): 250-259.
Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl是一种凝血酶荧光底物，广泛用于检测丝氨酸蛋白酶活性，其激发波长和发射波长分别为380nm和460nm。
Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl的核心结构包含一个荧光基团7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），当底物被蛋白酶水解时，AMC被释放，产生强荧光信号（激发波长380nm，发射波长460nm）。Gly-Pro-Arg序列是凝血酶的特异性识别位点，因此该底物对凝血酶具有高度选择性，同时也适用于其他丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶、激肽释放酶等）的研究。Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl还可用于高通量筛选凝血酶抑制剂，或检测血液样本中凝血酶的活性以辅助诊断凝血功能异常[1][2]。
本实验方案仅提供实验指导，实际应用须根据您的实际需求进行修改。
结肠上清液中的胰蛋白酶样活性检测[1][2]。
1. 溶液准备
底物溶液：将Tos-Gly-Pro-Arg-AMC . HCl溶解在50mM Tris-HCl（pH 8.0）缓冲液中，配制成10mM的储存液。使用前稀释至工作浓度100µM，并预热至室温。
2. 样品制备
A: 取50mg远端结肠样本，用Krebs溶液冲洗后速冻并存于-80℃。
B: 使用液氮粉碎样本以确保酶活性，加入蛋白裂解缓冲液裂解15min，离心后收集上清液备用。
3. 荧光检测
A:将结肠上清液置于冷96孔板中，确保样品保持低温以避免酶活性损失。
B:加入预热至室温的底物溶液，孵育20min。
C:使用酶标仪在激发波长380nm、发射波长460nm的条件下动态检测AMC的荧光强度变化，并计算酶活性。
注意事项：
1）为了您的安全和健康，使用时请穿好实验服，佩戴好防护手套等进行操作。
2）酶活性实验受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索最适浓度。
References:
[1]. Ceuleers H, Hanning N, Heirbaut J, et al. Newly developed serine protease inhibitors decrease visceral hypersensitivity in a post?inflammatory rat model for irritable bowel syndrome[J]. British Journal of Pharmacology, 2018, 175(17): 3516-3533.
[2]. Corvo I, Cancela M, Cappetta M, et al. The major cathepsin L secreted by the invasive juvenile Fasciola hepatica prefers proline in the S2 subsite and can cleave collagen[J]. Molecular and biochemical parasitology, 2009, 167(1): 41-47.
| Cas No. | 117961-27-0 | SDF | |
| 分子式 | C30H37N7O7S · HCl | 分子量 | 676.19 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4789 mL | 7.3944 mL | 14.7887 mL |
| 5 mM | 0.2958 mL | 1.4789 mL | 2.9577 mL |
| 10 mM | 0.1479 mL | 0.7394 mL | 1.4789 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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