Z-Arg-Arg-AMC
目录号 : GA23711
Z-Arg-Arg-AMC是组织蛋白酶B的特异性底物，Ex/Em为360/460nm。
Cas No.:88937-61-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Z-Arg-Arg-AMC is a specific substrate for histone B with an Ex/Em of 360/460nm. Z-Arg-Arg-AMC has pH-dependent cleavage properties.At neutral pH, Z-Arg-Arg-AMC is readily cleaved by histone B. However, Z-Arg-Arg-AMC is very poorly active at acidic pH with only one-third of the activity at neutral pH [1-4].
References:
[1] Ma C, Liang K, Tang L, He S, Liu X, He M, Li Y. Identification and characteristics of a cathepsin L-like cysteine protease from Clonorchis sinensis. Parasitol Res. 2019 Mar;118(3):829-835.
[2] Yoon MC, Phan V, Podvin S, Mosier C, O'Donoghue AJ, Hook V. Distinct Cleavage Properties of Cathepsin B Compared to Cysteine Cathepsins Enable the Design and Validation of a Specific Substrate for Cathepsin B over a Broad pH Range. Biochemistry. 2023 Aug 1;62(15):2289-2300.
[3] Yoon M C, Hook V, O’Donoghue A J. Cathepsin B dipeptidyl carboxypeptidase and endopeptidase activities demonstrated across a broad pH range[J]. Biochemistry, 2022, 61(17): 1904-1914.
[4] Klemenčič M, Novinec M, Dolinar M. Orthocaspases are proteolytically active prokaryotic caspase homologues: the case of M icrocystis aeruginosa[J]. Molecular Microbiology, 2015, 98(1): 142-150.
Z-Arg-Arg-AMC是组织蛋白酶B的特异性底物，Ex/Em为360/460nm。Z-Arg-Arg-AMC具有pH依赖性的裂解特性，在中性pH下，Z-Arg-Arg-AMC很容易被组织蛋白酶B切割，但Z-Arg-Arg-AMC在酸性pH下的活性很差，只有中性pH下活性的三分之一[1-4]。
本方案来自文献，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液的配置：
（1）使用无水DMSO溶解Z-Arg-Arg-AMC至100mM，分装为小份于-20℃储存，避免反复冻融。
（2）使用PAB（Hank's平衡盐溶液不含碳酸氢钠，含有0.6mM CaCl2，0.6mM MgCl2，2mM L-cysteine，25mM Pipes）稀释Z-Arg-Arg-AMC，配置浓度为5-100μM的工作液。
注意：请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2. 组织蛋白酶B活性的细胞测定
（1）将细胞铺于96孔板中并生长至80%的汇合度（每孔1-2万个细胞）。
（2）吸弃培养基，使用0.1mL Dulbecco's NaCl/Pi洗涤细胞。
（3）将细胞与0.2mL PAB在37°C下孵育30分钟。
（4）将缓冲液替换为含有100µM Z-Arg-Arg-AMC的新鲜PAB，在存在或不存在0.1% Triton X-100（可增加Z-Arg-Arg-AMC的水解活性）的情况测定细胞组织蛋白酶B的活性。
（5）使用Labsystems Fluoroskan II酶标仪在动力学模式下在37°C下使用360nm激发滤光片和460nm发射滤光片进行检测。
Reference:
[1] Hulkower KI, Butler CC, Linebaugh BE, Klaus JL, Keppler D, Giranda VL, Sloane BF. Fluorescent microplate assay for cancer cell-associated cathepsin B. Eur J Biochem. 2000 Jul;267(13):4165-70.
| Cas No. | 88937-61-5 | SDF | |
| 分子式 | C30H39N9O6 | 分子量 | 621.7 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.6085 mL | 8.0425 mL | 16.0849 mL |
| 5 mM | 0.3217 mL | 1.6085 mL | 3.217 mL |
| 10 mM | 0.1608 mL | 0.8042 mL | 1.6085 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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