Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC
目录号 : GA23715
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC（Z-RLRGG-AMC）是一种 SARS-CoV 木瓜蛋白酶（PLpro）的肽底物，RLRGG是泛素（Ub）的C末端序列。Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC的最大激发光/发射光波长分别为340/450 nm。
Cas No.:167698-69-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Quality Control & SDS
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- Purity: >98.00%
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本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC，终浓度为1 mM。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用实验缓冲液稀释储存液到所需的工作浓度。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2.使用Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC测定PLpro活性步骤[1](来自文献,仅做参考)
（1）配制测定缓冲液，含有50 mM HEPES（pH 7.4）、0.01% Triton X-100（v/v）、0.1 mg/mL BSA和2 mM DTT。设置反应体系：在384孔板中，每孔反应体积为50μL。
（2）向每个孔中加入PLpro，终浓度为100 nM。
（3）向每个孔中加入5μL Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC储备液，终浓度为50μM。
（4）用酶标仪监测底物水解。激发波长为340 nm，发射波长为450 nm，每3分钟记录一次荧光信号。
注意：该方案为使用Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC测定PLpro活性提供指导。可以根据其他文献和具体实验要求进行调整。
References:
[1]Fu Z, Huang B, Tang J, et al. The complex structure of GRL0617 and SARS-CoV-2 PLpro reveals a hot spot for antiviral drug discovery[J]. Nature communications, 2021, 12(1): 488.
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC (Z-RLRGG-AMC) is a peptide substrate of SARS-CoV papain (PLpro), where RLRGG is the C-terminal sequence of ubiquitin (Ub)[1, 2]. The maximum excitation/emission wavelengths of Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC are 340/450 nm, respectively [3].
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC is primarily used to study protease activity. By measuring the fluorescence intensity of released 7-amino-4-methylcoumarin (AMC), the catalytic activity of proteases can be assessed[4]. Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC consists of a pentapeptide sequence linked to the fluorescent group AMC. The "Z" denotes the benzyloxycarbonyl (Z) protecting group, which is used to protect amino acids from nonspecific reactions [5].
References:
[1] Báez-Santos Y M, Mielech A M, Deng X, et al. Catalytic function and substrate specificity of the papain-like protease domain of nsp3 from the Middle East respiratory syndrome coronavirus[J]. Journal of virology, 2014, 88(21): 12511-12527.
[2] Li L, Ma L, Hu Y, et al. Natural biflavones are potent inhibitors against SARS-CoV-2 papain-like protease[J]. Phytochemistry, 2022, 193: 112984.
[3] Fu Z, Huang B, Tang J, et al. The complex structure of GRL0617 and SARS-CoV-2 PLpro reveals a hot spot for antiviral drug discovery[J]. Nature communications, 2021, 12(1): 488.
[4] Wang C, Chen S, Yeo S, et al. Elevated p62/SQSTM1 determines the fate of autophagy-deficient neural stem cells by increasing superoxide[J]. Journal of Cell Biology, 2016, 212(5): 545-560.
[5] Kadereit D, Waldmann H. Enzymatic protecting group techniques[J]. Chemical Reviews, 2001, 101(11): 3367-3396.
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC（Z-RLRGG-AMC）是一种 SARS-CoV 木瓜蛋白酶（PLpro）的肽底物，RLRGG是泛素（Ub）的C末端序列[1, 2]。Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC的最大激发光/发射光波长分别为340/450 nm[3]。
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC主要用于研究蛋白酶的活性，通过测定7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）释放的荧光强度，可以评估蛋白酶的催化活性[4]。Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC由一个五肽序列与荧光基团AMC连接，Z表示苄氧羰基（Z）保护基团，用于保护氨基酸免受非特异性反应[5]。
| Cas No. | 167698-69-3 | SDF | |
| 分子式 | C40H56N12O9 | 分子量 | 848.96 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.1779 mL | 5.8896 mL | 11.7791 mL |
| 5 mM | 0.2356 mL | 1.1779 mL | 2.3558 mL |
| 10 mM | 0.1178 mL | 0.589 mL | 1.1779 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。