Hoechst 33258 analog
目录号 : GC36239
Hoechst 33258 analog是核酸染色剂Hoechst 33258的类似物，与dsDNA结合后发出蓝色荧光，最大激发光/发射光为365⁄458 nm。
Cas No.:258843-62-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备Hoechst染色液
(1) 配制Hoechst染料储存液: 使用DMSO溶解固体粉末，配置成10mg/mL的Hoechst染料储存液。
注意: Hoechst储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2)工作液制备:使用预热的无血清培养基或缓冲液(如HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为10μg/mL的Hoechst工作液。
注意: 请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度，现用现配。
2、细胞染色
2.1 悬浮细胞（以6孔板为例）
(1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)加入1mL的Hoechst染料工作液，室温避光孵育5-10 min分钟。
(3)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(4)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
2.2 贴壁细胞
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的Hoechst染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育5-15min分钟。
(4)吸弃染料工作液，使用培养液洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。
3.显微镜检测：Hoechst 33258的激发/发射光分别为365⁄458nm。
注意事项：
① 对于固定的细胞或组织样品的染色，固定后需漂洗去除固定剂；
② Hoechst 33258染色通常在其他染色后进行，如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色；
③ 为减缓荧光淬灭，建议使用抗荧光淬灭封片剂；
④ 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光；
⑤ Hoechst 33258对人体有一定刺激性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. K D Harshman, P B Dervan. Molecular recognition of B-DNA by Hoechst 33258. 1985 Jul 11;13(13):4825-35. doi: 10.1093/nar/13.13.4825.
| Cas No. | 258843-62-8 | SDF | |
| Canonical SMILES | O=C(O)CCCOC1=CC=CC(C2=NC3=CC=C(C4=NC5=CC=C(N6CCN(C)CC6)C=C5N4)C=C3N2)=C1 | ||
| 分子式 | C29H30N6O3 | 分子量 | 510.59 |
| 溶解度 | DMSO: ≥ 51 mg/mL (99.88 mM) | 储存条件 | Store at 2-8°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9585 mL | 9.7926 mL | 19.5852 mL |
| 5 mM | 0.3917 mL | 1.9585 mL | 3.917 mL |
| 10 mM | 0.1959 mL | 0.9793 mL | 1.9585 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- Purity: >99.50%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet