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Indo-1 AM (Indo-1 Acetoxymethyl ester) Sale

(Synonyms: 4-(6-羧基-2-吲哚基)-4'-甲基-2,2'-(乙烯基二氧)二苯胺-N,N,N',N'-四乙酸四(乙酰氧基甲基)酯,Indo-1 Acetoxymethyl ester) 目录号 : GC33592

A cell-permeant precursor of Indo-1

Indo-1 AM (Indo-1 Acetoxymethyl ester) Chemical Structure

Cas No.:112926-02-0

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

Description

Indo-1 AM is a cell-permeant acetoxymethyl ester of the ratiometric fluorescent calcium indicator indo-1 . As indo-1 AM enters cells, it is hydrolyzed by intracellular esterases to produce Indo-1. Indo-1 is ideal for analyses using flow cytometry, as it uses a single excitation source, typically 349-364 nm light from an argon-ion laser. The emission maximum shifts from 475-485 nm without calcium to 400-410 nm when indo-1 binds calcium.1,2 Indo-1 is prone to photobleaching, which limits its usefulness in methods involving microscopy.1

1.Paredes, R.M., Etzler, J.C., Watts, L.T., et al.Chemical calcium indicatorsMethods46(3)143-151(2008) 2.Grynkiewicz, G., Poenie, M., and Tsien, R.Y.A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence propertiesJ. Biol. Chem.260(6)3440-3450(1985)

实验参考方法

本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。

1.制备染色液

(1)配置储存液: 在高质量无水DMSO中制备浓度为1-10mM的AM酯储存液;

注意:

①    未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存,避免反复冻融;

②    乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。

(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清和酚红的培养基或PBS)稀释储存液,配制浓度为1-10μM的工作液。

注意:

①    AM酯染色工作液制备时,有时需要往储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液,以增强AM探针的水溶性;

②    Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但PluronicF-127可降低AM探针的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议加入储存液长期保存;

③    配制20%(w/v) Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末(货号: GB30090),加入500μl DMSO,40-50℃加热20-30min,室温保存。如有结晶析出可重新加热溶解,不影响使用;

④    (可选)GLPBIO提供溶解好的Pluronic F-127(20% Solution in DMSO) ,货号:GB30091;

⑤    添加等体积20% Pluronic F-127溶液到储存液中,从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%;

⑥    请根据实际情况调整工作液浓度,现用现配,避免反复冻融。

 

2.细胞悬浮染色

(1)悬浮细胞:经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,使用PBS或其他缓冲液清洗两次,每次5分钟;

(2)贴壁细胞:使用PBS或其他缓冲液清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min;

(3)加入染料工作溶液重悬细胞,室温或低于室温条件下避光孵育20min-2h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索;

注:

①  AM酯类染料在大部分细胞中的推荐工作浓度为4-5μM,具体使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度;

②  (可选)如果细胞内含有机阴离子转运体,可能需要在细胞培养基中加入丙磺舒(GC16825,Probenecid,1-2.5mM)或磺吡酮(GC11049 ,Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM),以降低去酯化 探针的泄露水平。丙磺舒或磺吡酮储存液偏碱,因此加入培养基后需要重新调整pH;

③  若使用含血清的培养基,血清内酯酶会降解AM,从而降低染料加载效果;而含酚红培养基会使本底值略偏高,建议加入染色工作液前,对细胞清洗2~3次;

④  降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除染色液,加入PBS或其他缓冲液清洗2-3次,去除残留探针;

(5)室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

 

3.细胞贴壁染色

(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞;

(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中;

(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞;

(4) 室温或低于室温条件下避光孵育20min-2h。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索;

(5)孵育结束后吸弃染料工作液,使用PBS或其他缓冲液清洗盖玻片2~3次;

(6)室温孵育30min。

 

4.显微镜检测: Indo-1可以使用氩离子激光器的349-364nm光源激发;结合钙离子后,发射光最大值从475-485 nm变为400-410 nm。

 

注意事项:

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

化学性质

Cas No. 112926-02-0 SDF
别名 4-(6-羧基-2-吲哚基)-4'-甲基-2,2'-(乙烯基二氧)二苯胺-N,N,N',N'-四乙酸四(乙酰氧基甲基)酯,Indo-1 Acetoxymethyl ester
Canonical SMILES O=C(C1=CC2=C(C=C1)C=C(C3=CC=C(N(CC(OCOC(C)=O)=O)CC(OCOC(C)=O)=O)C(OCCOC4=CC(C)=CC=C4N(CC(OCOC(C)=O)=O)CC(OCOC(C)=O)=O)=C3)N2)OCOC(C)=O
分子式 C47H51N3O22 分子量 1009.91
溶解度 Soluble in DMSO 储存条件 Store at -20°C
General tips 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。

溶解性数据

制备储备液
1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9902 mL 4.9509 mL 9.9019 mL
5 mM 0.198 mL 0.9902 mL 1.9804 mL
10 mM 0.099 mL 0.4951 mL 0.9902 mL
  • 摩尔浓度计算器

  • 稀释计算器

  • 分子量计算器

质量
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浓度
x
体积
x
分子量
 
 
 
*在配置溶液时,请务必参考产品标签上、MSDS / COA(可在Glpbio的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。

计算

动物体内配方计算器 (澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
给药剂量 mg/kg 动物平均体重 g 每只动物给药体积 ul 动物数量
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方)
% DMSO % % Tween 80 % saline
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