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Live-Dead Cell Staining Kit

目录号 : GK10030

Live-Dead Cell Staining Kit被用于同时荧光染色活细胞和死细胞。

Live-Dead Cell Staining Kit  Chemical Structure

规格 价格 库存 购买数量
500T
¥595.00
现货
1000T
¥980.00
现货

电话:400-920-5774 Email: sales@glpbio.cn

Customer Reviews

Based on customer reviews.

Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

Description

Live-Dead Cell Staining Kit被用于同时荧光染色活细胞和死细胞。该试剂盒包含两种染料-钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙锭 (PI),分别染色活细胞和死细胞。 Calcein-AM是Calcein的乙酰氧基甲酯,具有高度亲脂性,且可渗透细胞膜。尽管Calcein-AM本身不是荧光分子,但在经过活细胞中的酯酶消化后,它将转化为Calcein,发出强烈的绿色荧光 (最大激发波长:490 nm,最大发射波长:515nm)。因此,Calcein-AM仅染色活细胞。

相反,PI(一种核染色染料)不能穿过活细胞膜。它能够穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核,并插入细胞核的DNA双螺旋中,发出红色荧光(最大激发波长:535 nm,最大发射波长:617 nm)。

由于calcein和PI-DNA均可在490 nm处激发,因此可以通过荧光显微镜或流式细胞仪同时监测活细胞和死细胞。在545 nm激发下,只有死细胞才能发出红色荧光。由于最佳的染色条件会因细胞系的不同而变化,因此我们建议应分别确定PI和Calcein-AM的合适浓度。

请注意,PI被怀疑具有高度致癌性;需要谨慎处理。

我们的产品Live-Dead Cell Staining Kit被用于同时荧光染色活细胞和死细胞。该试剂盒包含两种染料-钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙锭 (PI),分别染色活细胞和死细胞。 Calcein-AM是Calcein的乙酰氧基甲酯,具有高度亲脂性,且可渗透细胞膜。尽管Calcein-AM本身不是荧光分子,但在经过活细胞中的酯酶消化后,它将转化为Calcein,发出强烈的绿色荧光 (最大激发波长:490 nm,最大发射波长:515nm)。因此,Calcein-AM仅染色活细胞。

相反,PI(一种核染色染料)不能穿过活细胞膜。它能够穿过死细胞膜的无序区域到达细胞核,并插入细胞核的DNA双螺旋中,发出红色荧光(最大激发波长:535 nm,最大发射波长:617 nm)。

由于calcein和PI-DNA均可在490 nm处激发,因此可以通过荧光显微镜或流式细胞仪同时监测活细胞和死细胞。在545 nm激发下,只有死细胞才能发出红色荧光。由于最佳的染色条件会因细胞系的不同而变化,因此我们建议应分别确定PI和Calcein-AM的合适浓度。

请注意,PI被怀疑具有高度致癌性;需要谨慎处理。

实验参考方法

操作指南

1.将 Calcein-AM 溶液和 PI 溶液置于室温进行解冻。

将 5μL Calcein-AM 溶液(2 mM)和 15μL PI 溶液(1.5 mM)加入 5 mL PBS 中,充分混合。 在这种情况下,Calcein-AM 的工作浓度为 2μM,PI 为 4.5μM。

由于各种细胞系的最佳染色条件不同,因此建议在初始实验中进行梯度浓度筛选。原则上使 用最低的探针浓度以获得最佳的荧光结果。

由于 Calcein-AM 在水溶液中的稳定性很差,因此只能在每次实验之前制备染色液,并在一 天之内使用。

注意:PI 具有高度的致癌性和致突变性,因此在操作时应戴手套,安全护目镜和面罩。如 果它与您的皮肤接触,请立即用大量自来水清洗。

2. 对于贴壁细胞,用胰蛋白酶消化细胞,然后通过离心(1000 rpm,3 分钟)收集细胞。

对于悬浮的细胞,通过离心(1000 rpm,3 分钟)收集细胞。

3. 用 PBS 洗涤细胞 2-3 次以除去培养基中的酯酶。

4. 用 PBS 制备细胞悬液,其中细胞密度为 1x105至 1x106 细胞/ ml。

5. 将 200μl 细胞悬液移至 EP 管中。然后将 100μl 染色溶液添加到细胞中。混匀并在 37℃ 下孵育 15 分钟,避光。 注意:如果需要,将孵育时间延长至 30 分钟。

6. 如果使用荧光显微镜,则将 10μl 细胞和染色液放在载玻片上,并盖上盖玻片。 使用 490 nm 激发波长来检测荧光,可以同时监测活细胞和死细胞。在 545 nm 激发下,只能观察到死细胞。 您也可以使用流式细胞仪或其他机器。

预实验

如果需要确定每种试剂的最佳浓度,请按照以下步骤操作:

1. 使用 0.1%皂苷或 0.1-0.5%洋地黄皂苷孵育细胞 10 分钟来制备死细胞。或者在 70%乙 醇中孵育 30 分钟。

2. 用 0.1-10 μM PI 溶液染色死细胞,以得到仅仅对细胞核染色,而不会对细胞质染色的最 佳工作浓度。 用 0.1-10 μM Calcein-AM 溶液染色死细胞以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用 此浓度进行活细胞染色,观察是否活细胞能被染色。

注意

1. 处理剩余的染料溶液时,请遵循有毒溶液处理准则和规定,并将处理委托给工业废物处 理公司。

2. 在以前的实验中,CFSE 在一篇论文中被报道荧光染料被保留在细胞内长达 8 周。而 Calcein-AM 和 BCECF-AM 的被观察到荧光可以保持长达三天。

3. 如果染色后染料似乎没有留在活细胞内,则可能是因为活细胞由于细胞功能而将染料排 出,或者使用的试剂不足。

产品组成

Components 500 Tests 1000 Tests
Calcein-AM Solution (2 mM) 50 μL 50 μL × 2
PI Solution (1.5 mM) 150 μL 150 μL × 2
Storage -20°C, protect from light

产品文档

Quality Control & SDS

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