LysoTracker Blue DND-22
(Synonyms: LysoTracker Blue DND-22; LysoTracker Red DND-99; Lysotracker Green; 溶酶体探针; 二氢乙啶DHE; DCFH-DA; 超氧化物歧化酶 (SOD); 蓝色溶酶体荧光探针) 目录号 : GC26409Lysotracker探针是向酸性荧光探针，用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。
Cas No.:215247-93-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
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注意事项
1) 整个操作过程中注意避光。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。第一次使用请将本品按单次用量分装保存，≤-20℃避光干燥保存，尽量避免反复冻融。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。
1.工作液的配制
利用生长培养基或合适的缓冲液将1mM 储存液稀释至工作浓度，工作液需现配现用。对于 Lysotracker系列溶酶体探针，推荐工作液浓度为50-75nM;
【注意】:
1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
2.染色步骤(贴壁细胞)
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针培养基(必须完全覆盖住细胞),在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h (具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)利用不含探针的新鲜培养基替换上述染色液，并且用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察(见附表1)。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。
3.染色步骤(悬浮细胞)
1)离心沉淀细胞，吸除上清。
2)利用适量37℃预热的含探针培养基重是细胞，在适合特定细胞类型的生长条件下解育细胞30min-2h (具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)离心，吸除染色液，加入新鲜培养基重悬细胞。
4)用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。
Lysotracker probe is an acidic fluorescent probe used for labeling and tracing acidic organelles in living cells. These probes have several important features, including highly selective targeting of acidic organelles and effective labeling of live cells at nanomolar concentrations. In addition, the LysoTracker series has several fluorescent colors, which are particularly suitable for multi-color labeling experiments.
Lysotracker probe, containing a fluorescent element connected to a weak base, partially protonated at neutral pH, capable of freely penetrating the cell membrane and typically aggregating on spherical organelles. Research has found that Lysotracker probes must be at extremely low concentrations (usually around 50nM) to achieve excellent selectivity. Although the retention mechanisms of these probes have not been fully studied, they are likely related to the protonation and retention of acidic organelles, even if subsequent treatment with weakly alkaline cell penetrating compounds typically does not reversibly alter staining results. The endocytosis kinetics study of Lysotracker probe shows that the uptake rate of dyes into live cells is only a few seconds. However, these lysosomal probes can lead to lysosomal alkalization, such as prolonged incubation inducing an increase in lysosomal pH. Therefore, it is recommended to incubate cells with probes for only 1-5 minutes before imaging.
LysoTracker Blue DND-22 is a blue fluorescent dye that stains acidic compartments in living cells, with a maximum excitation/emission wavelength of~373/422nm. This product is a DMSO storage solution with a concentration of 1mM. The recommended working concentration for lysosomal staining of live cells is 50-75nM, which needs to be optimized and adjusted according to the actual situation.
Lysotracker探针是向酸性荧光探针，用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征，包括高度选择靶向酸性细胞器和纳摩尔浓度有效标记活细胞。另外，LysoTracker系列有几种荧光颜色，特别适合用于多色标记实验。
Lysotracker探针，含一连接到弱碱基上的荧光素，中性pH下呈部分质子化，能够自由穿透细胞膜且典型聚集在球形细胞器上。研究发现，Lysotracker探针必须在极低浓度(通常约50nM)下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留机制虽然没有被完全研究透，但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关，即使后续的弱碱性细胞渗透化合物处理细胞通常不会可逆化染色结果。Lysotracker探针的内吞化动力学研究显示染料进入活细胞的摄入速率仅几秒即可。然而，这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化，比如长期孵育会诱使溶酶体pH的增加。因此，建议成像前用探针孵育细胞的时间仅1-5min就好。
LysoTracker Blue DND-22是对活细胞中的酸性区室进行染色的一种蓝色荧光染料，具有~373/422nm的最大激发/发射波长。本品为DMSO储存液，浓度1mM。用于活细胞的溶酶体染色，建议工作浓度为50-75nM，需根据实际情况做优化调整。
| Cas No. | 215247-93-1 | SDF | |
| 别名 | LysoTracker Blue DND-22; LysoTracker Red DND-99; Lysotracker Green; 溶酶体探针; 二氢乙啶DHE; DCFH-DA; 超氧化物歧化酶 (SOD); 蓝色溶酶体荧光探针 | ||
| 分子式 | C24H38Cl4N4 | 分子量 | 524.403 |
| 溶解度 | 储存条件 | Desiccate at -20°C; protect from light | |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9069 mL | 9.5347 mL | 19.0693 mL |
| 5 mM | 0.3814 mL | 1.9069 mL | 3.8139 mL |
| 10 mM | 0.1907 mL | 0.9535 mL | 1.9069 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。