MitoMark Red I
目录号 : GC50454MitoMark Red I 是一种荧光线粒体标记物。
Cas No.:167095-09-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Red fluorescent mitochondrial stain. Fluorescence intensity is dependent on mitochondrial membrane potential. Excitation/emission maxima λ ~ 578/599 nm.
References:
[1]. Poot et al (1996) Analysis of mitochondrial morphology and function with novel fixable fluorescent stains. J.Histochem.Cytochem. 44 1363 PMID:8985128
[2]. Buckman et al (2001) MitoTracker labeling in primary neuronal and astrocytic cultures: influence of mitochondrial membrane potential and oxidants. J.Neuroscience Methods. 104 165 PMID:11164242
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备染色液
（1）染料储存液:使用DMSO将MitoMark Red I溶解成1-5mM的储存液。配置好的储存液分装后于-20℃避光保存。
（2）染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为25-500 nM的MitoMark Red I工作液。
注意:
①MitoMark Red I常用的工作浓度范围是25-500nM，建议使用相对偏低浓度进行染色。若使用更高浓度可能会染上其他细胞结构，为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度；
②对于后续需要进行固定和透化的细胞染色，建议使用工作浓度范围在100-500nM；
③请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-45min分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-45min分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。MitoMark Red I的最大激发/发射波长578/599 nm。
注意事项：
① 若后续步骤如ICC需要透化，建议使用含表面活性剂（如Triton X-100）的缓冲液来透化细胞。细胞也可以用冰丙酮透化处理5min，之后用PBS清洗（即使后续细胞不用进行其它抗体标记，这一丙酮透化步骤也可能改善信噪比）；
②细胞如需固定染色，建议使用含2-4%多聚甲醛的新鲜配制预热的缓冲液或培养基进行固定；
③荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
④为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. K Gilmore, M Wilson. The use of chloromethyl-X-rosamine (Mitotracker red) to measure loss of mitochondrial membrane potential in apoptotic cells is incompatible with cell fixation. 1999 Aug 1;36(4):355-8. doi: 10.1002/(sici)1097-0320(19990801)36:4<355::aid-cyto11>3.0.co;2-9.
| Cas No. | 167095-09-2 | SDF | |
| Canonical SMILES | ClCC(C=C1)=CC=C1C(C(C2=C3CCC4)=CC5=C3N4CCC5)=C6C(O2)=C7C8=[N+](CCC7)CCCC8=C6.[Cl-] | ||
| 分子式 | C32H32Cl2N2O | 分子量 | 531.52 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.8814 mL | 9.407 mL | 18.814 mL |
| 5 mM | 0.3763 mL | 1.8814 mL | 3.7628 mL |
| 10 mM | 0.1881 mL | 0.9407 mL | 1.8814 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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