MMAE-d8
(Synonyms: Monomethyl auristatin E-d8; Deuterated labeled MMAE) 目录号 : GC63461
MMAE-d8是一种氘化标记的一甲基澳瑞他汀E（MMAE）， 可用于MMAE的检测。
Cas No.:2070009-72-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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MMAE-d8 is a deuterated monomethyl auristatin E (MMAE) that can be used for the detection of MMAE. MMAE is a very effective antimitotic agent that inhibits cell division by blocking the polymerization of tubulin[1].
MMAE is released by cathepsin B cleavage and/or catabolism after Antibody-drug conjugates(ADC) internalization into cells. ADC binds to tumor cells in vitro and releases its payload inside cancer cells after trafficking to appropriate subcellular organelles, such as lysosomes.After treatment of L-82 cells with five ADCs, CD30 (cAC10-vcMMAE, Drug-antibody ratio, DAR of 2, 4, or 8), CD70 (h1F6-vcMMAE, DAR of 4) or CD71 (cOKT9-vcMMAE, DAR of 4) at their respective IC50 concentrations, the intracellular MMAE concentrations were similar, ranging from 98 nmol/L to 150 nmol/L[1-2].
The intratumoral concentration of MMAE determines the in vivo antitumor activity of ADC, and the intratumoral MMAE concentration increases proportionally to the ADC dose. Moreover, the intratumoral MMAE concentrations obtained by cOKT9-vcMMAE and cAC10-vcMMAE treatment are similar at each dose[1].
References:
[1] Li F, Emmerton K K, Jonas M, et al. Intracellular released payload influences potency and bystander-killing effects of antibody-drug conjugates in preclinical models[J]. Cancer research, 2016, 76(9): 2710-2719.
[2] Yip V, Saad O M, Leipold D, et al. Monomethyl Auristatin E (MMAE), a Payload for Multiple Antibody Drug Conjugates (ADCs), Demonstrates Differential Red Blood Cell Partitioning Across Human and Animal Species[J]. Xenobiotica, 2024 (just-accepted): 1-13.
MMAE-d8是一种氘化标记的一甲基澳瑞他汀E（MMAE），可用于MMAE的检测。MMAE是一种非常有效的抗有丝分裂剂，通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞分裂[1]。
MMAE是由于组织蛋白酶B裂解和/或抗体-药物偶联物（ADC）内化到细胞后分解代谢而解离释放的。ADC在体外与肿瘤细胞结合，并在运输到适当的亚细胞细胞器（例如溶酶体）后在癌细胞内释放有效负载。在使用五种ADC，CD30（cAC10-vcMMAE，药物抗体比，DAR 为 2、4 或 8）、CD70（h1F6-vcMMAE，DAR 为 4）或CD71（cOKT9-vcMMAE，DAR 为 4）以各自的IC50 浓度处理L-82细胞后，细胞内MMAE浓度相似，范围在98 nmol/L至150 nmol/L之间[1-2]。
MMAE的瘤内浓度决定了ADC的体内抗肿瘤活性，瘤内MMAE浓度与ADC剂量成比例增加，并且，cOKT9-vcMMAE和cAC10-vcMMAE治疗获得的瘤内MMAE浓度在每个剂量下相似[1]。
本方案来自文献，请根据您的具体需要进行修改。
1. 收集经ADC处理20小时的细胞，计数后使用含有1.67 ng/ml氘标记的MMAE重悬，细胞密度为8.3×105个细胞/毫升。
2. 将样品在-20°C下裂解16小时，然后在4°C下，以21,100 RCF的转速离心15分钟。将上清液转移到12×75 mm硼硅酸盐玻璃管中，并在氮气流下干燥。将残余物重悬于20%甲醇和0.1%（v/v）甲酸中（为生成标准曲线，将不同浓度的0.017-3.33 ng/ml MMAE与1.67 ng/ml MMAE-d8混合在未经处理的肿瘤细胞裂解物中，并如上所述处理）。
3. LC-MS/MS分析：使用溶剂梯度法在色谱柱（30°C，5 μm，50 mm× 3 mm）上进行色谱分离。溶剂A为含有0.1%（v/v）甲酸的H2O，溶剂B为含0.1%（v/v）甲酸的乙腈。使用的梯度法为0-1分钟（20%B至60%B），1-1.5分钟（60%B至95%B），1.5-3分钟（95%B），3-4.1分钟（95%B至20%B），4.1-5分钟（20%B），流速为0.5ml/min。鞘气、辅助气和吹扫气分别设定为50、15和1任意单位。喷雾电压设置为3.5 kV，汽化器和毛细管温度分别保持在375 °C和350 °C。718.8 m/z −134.1 m/z和727.6 m/z – 134.1 m/z的跃迁分别用于MMAE和MMAE-d8的定量。
4. 样品采集和数据分析。
参考文献：
[1] Kang J C, Sun W, Khare P, et al. Engineering a HER2-specific antibody–drug conjugate to increase lysosomal delivery and therapeutic efficacy[J]. Nature biotechnology, 2019, 37(5): 523-526.
| Cas No. | 2070009-72-0 | SDF | |
| 别名 | Monomethyl auristatin E-d8; Deuterated labeled MMAE | ||
| 分子式 | C39H59D8N5O7 | 分子量 | 726.03 |
| 溶解度 | DMSO : 100 mg/mL (137.74 mM; Need ultrasonic) | 储存条件 | Store at -20°C,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.3774 mL | 6.8868 mL | 13.7735 mL |
| 5 mM | 0.2755 mL | 1.3774 mL | 2.7547 mL |
| 10 mM | 0.1377 mL | 0.6887 mL | 1.3774 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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