MQAE
(Synonyms: 解毒喹) 目录号 : GC30035
MQAE是一种非比例氯离子(Cl−)猝灭荧光传感物,最大激发光/发射光波长为350/460nm,用于测量细胞内Cl−浓度([Cl−]i)。
Cas No.:162558-52-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
MQAE functions as a non-ratiometric chloride ion (Cl−) quenching fluorescent sensor that is employed to measure intracellular Cl− concentration ([Cl−]i), with the maximum wavelength excitation/emission(350/460nm)[1]. MQAE is suitable for surface fluorescence microscopy, confocal microscopy, two-photon microscopy, flow cytometry and other biochemical analysis experiments[1-2].The fluorescence intensity diminishes when MQAE concentration decreases and increases when MQAE concentration increases regardless of any changes in [Cl−]i[2]. The intracellular distribution of MQAE is not uniform and is not affected by changes in cell volume caused by osmotic stress[3]. MQAE can bind to unknown subcellular structures, and these bound MQAE appear to enable the measurement of [Cl−]i in airway-ciliated cells even in the presence of changes in cell volume[1,4]. MQAE can be used to create a fluorescent probe for the detection of mitochondrial chloride ions[5]. The fluorescence of MQAE-based probe is pH-insensitive in the physiological pH range and is quenched by chloride ions, with a Stern-Volmer quenching constant of 201M-1 at pH 7.0[5].
References:
[1] Ikeuchi Y, Kogiso H, Hosogi S, et al. Measurement of [Cl−]i unaffected by the cell volume change using MQAE-based two-photon microscopy in airway ciliary cells of mice[J]. The journal of physiological sciences, 2018, 68: 191-199.
[2] Andersson C, Roomans G M. Determination of chloride efflux by X‐ray microanalysis versus MQAE‐fluorescence[J]. Microscopy research and technique, 2002, 59(6): 531-535.
[3] Koncz C, Daugirdas J T. Use of MQAE for measurement of intracellular [Cl−] in cultured aortic smooth muscle cells[J]. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 1994, 267(6): H2114-H2123.
[4] Miyazaki H, Shiozaki A, Niisato N, et al. Physiological significance of hypotonicity-induced regulatory volume decrease: reduction in intracellular Cl− concentration acting as an intracellular signaling[J]. American Journal of Physiology-Renal Physiology, 2007, 292(5): F1411-F1417.
[5] Park S H, Shin I, Kim Y H, et al. Mitochondrial Cl–-selective fluorescent probe for biological applications[J]. Analytical Chemistry, 2020, 92(18): 12116-12119.
MQAE是一种非比例氯离子(Cl−)猝灭荧光传感物,最大激发光/发射光波长为350/460nm,用于测量细胞内Cl−浓度([Cl−]i)[1]。MQAE适用于表面荧光显微镜、共聚焦显微镜、双光子显微镜以及流式细胞术等生化分析实验[1-2]。无论[Cl−]i变化如何,当MQAE浓度降低时,荧光强度减弱;当MQAE浓度增加时,荧光强度增强[2]。MQAE在细胞内的分布不均匀,不受渗透压引起的细胞体积变化的影响[3]。MQAE可与未知的亚细胞结构结合,而且这些结合的MQAE似乎可以在细胞体积发生变化的情况下测定气道纤毛细胞中的[Cl−]i [1,4]。MQAE可用于构建检测线粒体氯离子的荧光探针[5]。基于MQAE构建的探针的荧光在生理pH范围内对pH不敏感,被氯离子猝灭,在pH 7.0时Stern-Volmer猝灭常数为201M-1[5]。
本方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改。
1. 制备MQAE染色液:
在Krebs-hepes缓冲液(20mM HEPES, 128mM NaCl, 2.5mM KCl, 2.7mM CaCl2, 1mM MgCl2, 16mM葡萄糖;pH 7.4)中制备成5-10mM的MQAE工作溶液。配置完成后,使用0.22μm过滤膜进行过滤灭菌。请根据实际情况调整MQAE工作液的浓度,现配现用。
2. 悬浮细胞染色(6 孔板方案)
(1)对于悬浮细胞:
将细胞悬液在1000×g离心3-5min,仔细抽吸上清。用Krebs-Hepes缓冲液洗涤细胞两次(每次洗涤5min),洗涤之间在1000×g离心。
(2)对于贴壁细胞:
用Krebs-hepes缓冲液冲洗贴壁细胞两次。胰蛋白酶分离细胞,然后在1000×g离心3-5min。
(3)染料培养:
将细胞颗粒重悬于1mL染色工作液中。室温下黑暗孵育30-60min(最佳孵育时间可能因细胞类型而异)。
(4)孵育后处理:
在1000×g下离心5min,仔细取出上清。用PBS洗涤细胞2-3次(每次洗涤5min),洗涤之间离心。
(5)复苏观察:
将染色细胞重悬于无血清培养基或PBS中。进行显微镜检查。
3. 贴壁细胞染色:
(1)细胞培养制备:
在无菌盖上培养贴壁细胞,直到达到所需的融合度。
(2)染色前处理:
小心地取出培养基,将盖子放在加湿的容器中。
(3)染料培养:
将100μL染色工作液涂抹在盖盖的一侧,轻轻倾斜,使细胞单层均匀覆盖。室温黑暗孵育30-60min。
(4)染色后洗涤:
抽吸染料溶液,用PBS冲洗盖子2-3次(每次冲洗5min)。
4. 显微镜分析:
用荧光显微镜或流式细胞术检测染色细胞。MQAE在350/460nm处表现出最大的激发/发射波长。
References:
[1] Koncz C, Daugirdas J T. Use of MQAE for measurement of intracellular [Cl?] in cultured aortic smooth muscle cells[J]. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 1994, 267(6): H2114-H2123.
[2] Miyazaki H, Shiozaki A, Niisato N, et al. Physiological significance of hypotonicity-induced regulatory volume decrease: reduction in intracellular Cl? concentration acting as an intracellular signaling[J]. American Journal of Physiology-Renal Physiology, 2007, 292(5): F1411-F1417.
Cas No. | 162558-52-3 | SDF | |
别名 | 解毒喹 | ||
Canonical SMILES | COC1=CC2=CC=C[N+](CC(OCC)=O)=C2C=C1.[Br-] | ||
分子式 | C14H16BrNO3 | 分子量 | 326.19 |
溶解度 | DMSO : ≥ 35 mg/mL (107.30 mM) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 3.0657 mL | 15.3285 mL | 30.657 mL |
5 mM | 0.6131 mL | 3.0657 mL | 6.1314 mL |
10 mM | 0.3066 mL | 1.5328 mL | 3.0657 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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