NucPE1 (Nuclear Peroxy Emerald 1)
(Synonyms: Nuclear Peroxy Emerald 1) 目录号 : GC30066
NucPE1 (Nuclear Peroxy Emerald 1) (Nuclear Peroxy Emerald 1) 是一种核定位荧光过氧化氢，可特异性定位于细胞核，而无需附加靶向部分。
Cas No.:1404091-23-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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NucPE1 (Nuclear Peroxy Emerald 1) is a nuclear-localized fluorescent hydrogen peroxide that is specifically localized to cellular nuclei without appended targeting moieties.
NucPE1 features two major visible region absorptions (λabs=468 nm, ε=27,300 M-1cm-1; λabs=490 nm, ε=26,000 M-1cm-1) and a weak emission (λem=530 nm, Φ=0.117). Reaction of NucPE1 with H2O2 triggers a fluorescence increase upon its conversion to fluorophore NucPE1, which possesses one major absorption band at 505 nm (ε=19,100 M-1cm-1) with enhanced emission (λem=530 nm, Φ=0.626). NucPE1 selectively accumulates in the nuclei of a variety of mammalian cell lines as well as in whole model organisms like C. clegans, where it can respond to subcellular changes in H2O2 fluxes[1].
NucPE1 maintains the ability to selectively target nuclei in vivo. NucPE1 imaging reveals a reduction in nuclear H2O2 levels in worms overexpressing sir-2.1 compared to wildtype congeners, supporting a link between this longevity-promoting sirtuin protein and enhanced regulation of nuclear ROS pools[1].
[1]. Stanicka J, et al. NADPH oxidase-generated hydrogen peroxide induces DNA damage in mutant FLT3-expressing leukemia cells. J Biol Chem. 2015 Apr 10;290(15):9348-61. [2]. Dickinson BC, et al. A nuclear-localized fluorescent hydrogen peroxide probe for monitoring sirtuin-mediated oxidative stress responses in vivo. Chem Biol. 2011 Aug 26;18(8):943-8.
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备NucPE1 (Nuclear Peroxy Emerald 1)染色液
(1) 制备染料储存液: 使用DMSO将NucPE1溶解成5-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2) 制备染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-10μM的NucPE1工作液。
注意: 请根据实际情况调整染料工作液浓度，现用现配。
2、细胞贴壁染色
(1)使用荧光染料的前一天进行细胞铺板。
(2)实验药物/处理处理细胞后，使用PBS漂洗2-3次。
(3)加入预热的NucPE1染料工作液，37°C避光孵育15-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4) 孵育结束后，使用PBS洗涤2-3次，每次5分钟。
(5) 使用预温的无血清细胞培养基或PBS覆盖细胞（保持细胞湿润）。
3、细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS冲洗2-3次后，使用胰蛋白酶消化细胞，4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液。
(3) 使用0.5-1mL工作液重悬约1 x 106个细胞，37°C避光孵育15-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
4、荧光检测：使用共聚焦显微镜或流式细胞技术进行分析[1]。NucPE1探针的实时成像使用氩激光在488nm处激发进行，并使用约520nm的META检测器收集发射；当使用NucPE1和PO1进行多次染色时，应用多跟踪扫描模式采集图像[2]。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Stanicka J, et al. NADPH oxidase-generated hydrogen peroxide induces DNA damage in mutant FLT3-expressing leukemia cells. J Biol Chem. 2015 Apr 10;290(15):9348-61.
[2]. Dickinson BC, et al. A nuclear-localized fluorescent hydrogen peroxide probe for monitoring sirtuin-mediated oxidative stress responses in vivo. Chem Biol. 2011 Aug 26;18(8):943-8.
| Cas No. | 1404091-23-1 | SDF | |
| 别名 | Nuclear Peroxy Emerald 1 | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(B5OC(C)(C)C(C)(C)O5)=C4)C=C(NCC)C(C)=C3)C6=C1C=CC=C6 | ||
| 分子式 | C29H30BNO5 | 分子量 | 483.36 |
| 溶解度 | DMSO : 25 mg/mL (51.72 mM) | 储存条件 | 4°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0689 mL | 10.3443 mL | 20.6885 mL |
| 5 mM | 0.4138 mL | 2.0689 mL | 4.1377 mL |
| 10 mM | 0.2069 mL | 1.0344 mL | 2.0689 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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