p-Nitrobenzyl mesylate
(Synonyms: 4-Nitrobenzyl mesylate) 目录号 : GC44663
对硝基苄基甲磺酸酯（p-Nitrobenzyl mesylate; PNBM）是一种烷基化试剂，用于鉴定直接激酶底物。p-Nitrobenzyl mesylate的烷化原理：烷基化硫代磷酸化位点，形成硫代磷酸酯表位。
Cas No.:39628-94-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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p-Nitrobenzyl mesylate (PNBM) is an alkylating agent used to identify direct kinase substrates [1]. The alkylation mechanism of p-Nitrobenzyl mesylate is to alkylate the phosphorothioate site to form a phosphorothioate epitope [2]. This epitope is detected by immunoblotting, immunoprecipitation, or immunoaffinity purification using a phosphorothioate-specific monoclonal antibody [3].
References:
[1] Haines E, Chen T, Kommajosyula N, et al. Palbociclib resistance confers dependence on an FGFR-MAP kinase-mTOR-driven pathway in KRAS-mutant non-small cell lung cancer[J]. Oncotarget, 2018, 9(60): 31572.
[2] Allen J J. Development and application of technologies to study individual kinase substrate relationships[D]. University of California, San Francisco, 2008.
[3] Shi W, Zhang G, Ma Z, et al. Hyperactivation of HER2-SHCBP1-PLK1 axis promotes tumour cell mitosis and impairs trastuzumab sensitivity to gastric cancer. Nat Commun. 2021; 12: 2812[J].
对硝基苄基甲磺酸酯（p-Nitrobenzyl mesylate; PNBM）是一种烷基化试剂，用于鉴定直接激酶底物[1]。p-Nitrobenzyl mesylate的烷化原理：烷基化硫代磷酸化位点，形成硫代磷酸酯表位[2]。用硫代磷酸酯特异性单克隆抗体通过免疫印迹、免疫沉淀或免疫亲和纯化来检测该表位 [3]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解p-Nitrobenzyl mesylate并涡旋，制备50 mM储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用实验缓冲液稀释储存液到所需的工作浓度，例如：15 mM。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. 采用p-Nitrobenzyl mesylate进行体外激酶测定的实验步骤[1](来自文献,仅做参考)
（1）免疫沉淀：从细胞的裂解液中免疫沉淀CDK2、CDK4或CDK6。
（2）激酶反应：将免疫沉淀产物用激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl（pH 7.5），5 mM 甘油磷酸盐，2 mM DTT，0.1 mM Na3VO4，10 mM MgCl2）洗涤。在30 μl激酶缓冲液中加入2 μg RB蛋白和1 mM ATPγS。在30°C下孵育30分钟。
（3）烷基化反应：反应结束后，加入15 mM p-Nitrobenzyl mesylate，在室温下孵育2小时。
（4）检测激酶活性：通过Western blot分析使用硫磷酸酯特异性单克隆抗体检测激酶活性。
注意：本实验提供了一项采用p-Nitrobenzyl mesylate进行体外激酶测定的参考方案，反应浓度和反应时间可根据实际条件优化。操作应在无菌环境中进行，防止污染物干扰反应。避免直接接触反应试剂。
References:
[1] Haines E, Chen T, Kommajosyula N, et al. Palbociclib resistance confers dependence on an FGFR-MAP kinase-mTOR-driven pathway in KRAS-mutant non-small cell lung cancer[J]. Oncotarget, 2018, 9(60): 31572.
| Cas No. | 39628-94-9 | SDF | |
| 别名 | 4-Nitrobenzyl mesylate | ||
| 化学名 | 4-nitro-benzenemethanol, 1-methanesulfonate | ||
| Canonical SMILES | CS(OCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1)(=O)=O | ||
| 分子式 | C8H9NO5S | 分子量 | 231.2 |
| 溶解度 | 100mM in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.3253 mL | 21.6263 mL | 43.2526 mL |
| 5 mM | 0.8651 mL | 4.3253 mL | 8.6505 mL |
| 10 mM | 0.4325 mL | 2.1626 mL | 4.3253 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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