Phalloidin-TFAX 488
目录号 : GC50523Green fluorescent cytoskeletal stain; binds F-actin
Cas No.:289620-19-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1、制备染色液
(1)染料储存液:取低温保存的冻干粉置于室温回温至少20min,低速离心后,加入甲醇或无水DMSO充分溶解配制成10-100μM储存液。配置好的储存液分装后于-20或-80℃避光保存;
(2)染料工作液:建议使用PBS (本方案使用的PBS均为pH7.4的1xPBS)稀释储存液,配制浓度为10-200nM的工作液。
注意:
① 请根据实际情况调整及优化工作液浓度,现用现配。
② 可使用含1% BSA的PBS稀释储存液,能够降低非特异背景染色,也能最小化鬼笔环肽粘附到管壁的可能性。
2、细胞染色
(1)细胞爬片培养,生长达到70-80%的汇合度。
(2)吸弃培养液,用37°C预热的PBS清洗细胞2次。
(3)使用溶于PBS的4%多聚甲醛固定细胞,室温固定10min。
注意:
① 固定过程中甲醇能破坏肌动蛋白,建议使用无甲醇的固定液;
② 也可以在含3-4%福尔马林的PBS中室温固定细胞10-30分钟。
(4)室温下使用PBS清洗细胞2-3次,30s/次。
可选步骤①:用含10 mM乙醇胺(或0.1 M甘氨酸)的PBS处理细胞5分钟,用于淬灭过量的福尔马林;
可选步骤②:将含0.1% Triton X-100的PBS添加到固定细胞中,静置3-5分钟,以增加渗透性,然后用PBS洗涤细胞2-3次。
(5)取约100μl现配的染色工作液,使其完全覆盖盖玻片上的细胞,室温避光孵育30min。
注意:
①通常情况下4℃-37℃均适合用于染色。为了避免工作液的挥发,孵育过程中将盖玻片置于一密封的容器内;
②若有需要,此时可加入不同于TFAX 488荧光光谱的细胞核染色液。
(6)室温下使用PBS清洗细胞2-3次,30s/次。
(7)使用滤纸尽量吸干细胞表面液体,将盖玻片倒置在滴有一滴抗荧光淬灭剂的载玻片上,用纸巾轻轻吸掉多余淬灭剂,然后用透明指甲油密封盖玻片四周。将此法处理玻片置于4℃避光存放至少6个月仍能维持F-actin染色。
(8)荧光显微镜下观察染色结果,Phalloidin-TFAX 488的最大激发光/发射光为490/520nm。
注意事项:
① 可在细胞培养板/共聚皿中对细胞进行染色,步骤(7)改为滴加抗荧光淬灭剂到孔内保护荧光;
② 鬼笔环肽染色不适用于甲醇或丙酮固定的细胞,这类固定剂会破坏肌动蛋白的结构,并阻止鬼笔环肽进行染色,推荐使用0.2%戊二醛固定细胞;
③ 鬼笔环肽对pH值敏感:如果pH值升高,鬼笔环肽中关键的硫醚桥键会被裂解,从而失去对肌动蛋白的亲和力;
④ 鬼笔环肽染色可以与抗体染色搭配使用,推荐在一抗或二抗孵育期间加入鬼笔环肽偶联物;
⑤ 鬼笔环肽偶联物的最佳浓度和孵育时间取决于具体的细胞类型、固定/样本制备条件和/或细胞/组织对探针的通透性;
⑥ 悬浮细胞可以附着在多聚-D-赖氨酸微孔板或盖玻片上,然后使用贴壁细胞方案进行染色;
⑦ 如果细胞状态差,建议在染色液和洗涤液中加入血清(2-10%);
⑧ 在某些情况下,可以使用一步法快速进行鬼笔环肽染色:4℃下,在3.7% 福尔马林和50-100 µg/mL棕榈酰溶血磷脂酰胆碱与鬼笔环肽偶联物中孵育 20分钟,然后洗涤3次并封固;
⑨ 在未固定的样本中进行染色时,鬼笔环肽的结合会降低肌动蛋白亚基与肌动蛋白丝末端的解离速率,从而通过防止肌动蛋白丝解聚来稳定肌动蛋白丝;
⑩ 对于其他样本类型的染色流程,为优化固定条件,便于染色,建议在一定范围内变更固定时间和福尔马林浓度;
⑪ 鬼笔环肽可用于经福尔马林固定和透化的组织切片、细胞培养物等样本类型以及无细胞实验,也可用于已脱蜡的石蜡包埋样本,且鬼笔环肽染色不需要抗原修复;
⑫ 鬼笔环肽的半数致死量LD50为2 mg/kg,使用时请注意防护。但通常情况下,鬼笔环肽的用量很小,不会造成重大安全风险;
⑬ 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Green fluorescent cytoskeletal stain. Composed of the F-actin probe, Phalloidin , conjugated to TFAX 488. Suitable for use in super resolution microscopy techniques such as dSTORM. Excitation/emission maximum λ ~ 495/418 nm. Water soluble. We suggest making up a stock solution of this product by dissolving the vial contents in 1.5 mL methanol or DMSO. Please refer to the protocol tab for further information on using this product.
Panchuk-Voloshina et al (1999) Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates. J.Histochem.Cytochem. 47 1179 PMID:10449539
Cas No. | 289620-19-5 | SDF | |
Canonical SMILES | O=C([C@H](N1)CSC(NC2=C3C=CC=C2)=C3C[C@@H](C(N[C@@H](C[C@](O)(C)CNC(C4=CC(C(O[Li])=O)=C(C5=C(C=C6)C(OC7=C5C=CC(N)=C7S(=O)(O[Li])=O)=C(S(=O)([O-])=O)C6=[NH2+])C=C4)=O)C(NC(C(N[C@H]([C@H](C)O)C1=O)=O)C)=O)=O)NC([C@@H](NC8=O)C)=O)N9[C@H]8C[C@@H](O)C9 | ||
分子式 | C56H59Li2N11O20S3 | 分子量 | 1316.21 |
溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 0.7598 mL | 3.7988 mL | 7.5976 mL |
5 mM | 0.152 mL | 0.7598 mL | 1.5195 mL |
10 mM | 0.076 mL | 0.3799 mL | 0.7598 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。