Pyronin Y (Pyronine G)
(Synonyms: 派洛宁Y; Pyronine G; C.I. 45005) 目录号 : GC30149
A fluorescent probe for dsRNA
Cas No.:92-32-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Pyronin Y is a fluorescent probe which stains double stranded RNA in living or fixed cells as well as in tissues.1,2 When used in living cell preparations, it is commonly combined with 50-
1.Andrews, L.M., Jones, M.R., Digman, M.A., et al.Spectral phasor analysis of Pyronin Y labeled RNA microenvironments in living cellsBiomed. Opt. Express4(1)171-177(2013) 2.Mohtasham, N., Mahdavi-Shahri, N., Salehinejad, J., et al.Detection of nucleoproteins in squamous cell carcinoma, and dysplastic and normal mucosa in the oral cavity by methyl green-pyronin stainingJ. Oral Sci.52(2)239-243(2010) 3.Challen, G.A., Boles, N., Lin, K.K.L., et al.Mouse hematopoietic stem cell indentification and analysisCytometry A75(1)14-24(2013) 4.Tanke, H.J., Rothbarth, P.H., Vossen, J.M., et al.Flow cytometry of reticulocytes applied to clinical hematologyBlood61(6)1091-1097(1983)
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备Pyronin Y染色液
(1) 配制Pyronin Y染料储存液: 使用DMSO/无菌水溶解固体粉末，配置成1-5mM的Pyronin Y染料储存液。
注意: 使用无菌水配置的储存液需使用0.22μm滤膜过滤。Pyronin Y储存液建议分装后于-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2)工作液制备:使用合适的缓冲液(如HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-5μM的Pyronin Y工作液。
注意: 请根据实际情况调整Pyronin Y工作液浓度，现用现配。
2、细胞染色
2.1 悬浮细胞（以6孔板为例）
(1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)加入1mL的Pyronin Y染料工作液，室温避光孵育1-5min分钟。不同的细胞最佳培养时间不同。
(3)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(4)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
2.2 贴壁细胞
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的Pyronin Y染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育1-5min分钟。
(4)吸弃染料工作液，使用培养液洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。
3.显微镜检测：Pyronin Y的最大激发光为540-550nm，最大发射光为560-580nm。
注意事项：
①Pyronin Y适用于石蜡切片染色，建议在PBS中配置5%的Pyronin Y染色工作液，室温避光孵育5-10min；
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
②荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
③为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Taro Mannen, Tetsuro Hirose. RNase Sensitivity Screening for Nuclear Bodies with RNA Scaffolds in Mammalian Cells. 2017 Apr 20;7(8):e2232. doi: 10.21769/BioProtoc.2232.
[2]. Bo Li, Ying Wu, Xiao-Ming Gao. Pyronin Y as a fluorescent stain for paraffin sections. 2002 Jun-Jul;34(6-7):299-303. doi: 10.1023/a:1023325213198.
| Cas No. | 92-32-0 | SDF | |
| 别名 | 派洛宁Y; Pyronine G; C.I. 45005 | ||
| Canonical SMILES | CN(C1=CC2=[O+]C3=C(C=CC(N(C)C)=C3)C=C2C=C1)C.[Cl-] | ||
| 分子式 | C17H19ClN2O | 分子量 | 302.8 |
| 溶解度 | DMSO : 25 mg/mL (82.56 mM);Water : 4 mg/mL (13.21 mM) | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.3025 mL | 16.5125 mL | 33.0251 mL |
| 5 mM | 0.6605 mL | 3.3025 mL | 6.605 mL |
| 10 mM | 0.3303 mL | 1.6513 mL | 3.3025 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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