NADA-green
(Synonyms: NADA hydrochloride) 目录号 : GC50534
NADA-green是一种荧光D-氨基酸探针，适用于标记活细菌中的肽聚糖，最大激发/发射波长~450/555nm。
Cas No.:2253733-11-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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NADA-green is a fluorescent D-amino acid probe suitable for labeling peptidoglycan in living bacteria, with maximum excitation/emission wavelengths of ~450/555nm[1]. NADA-green can be efficiently incorporated into the peptidoglycan layer of different bacteria, strongly leading to peripheral and intermediate labeling of bacterial cell populations without affecting growth rate[2]. NADA-green can be used to detect modified cell wall peptides in E. coli[3]. NADA-green can be used to label living spirochetes[4]. NADA-green can activate the GPCR cannabinoid 1 (CB1) and transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) receptor[5]. NADA probes mainly report L,D-transpeptidase activity, tetrapeptide substrates, or both[6].
References:
[1] Kuru E, Tekkam S, Hall E, et al. Synthesis of fluorescent D-amino acids and their use for probing peptidoglycan synthesis and bacterial growth in situ[J]. Nature protocols, 2015, 10(1): 33-52.
[2] Arend K I, Schmidt J J, Bentler T, et al. Myxococcus xanthus predation of Gram-positive or Gram-negative bacteria is mediated by different bacteriolytic mechanisms[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2021, 87(5): e02382-20.
[3] Kuru E, Hughes H V, Brown P J, et al. In situ probing of newly synthesized peptidoglycan in live bacteria with fluorescent D‐amino acids[J]. Angewandte Chemie, 2012, 124(50): 12687-12691.
[4] Jutras B L, Scott M, Parry B, et al. Lyme disease and relapsing fever Borrelia elongate through zones of peptidoglycan synthesis that mark division sites of daughter cells[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016, 113(33): 9162-9170.
[5] Fawley J A, Hofmann M E, Andresen M C. Cannabinoid 1 and transient receptor potential vanilloid 1 receptors discretely modulate evoked glutamate separately from spontaneous glutamate transmission[J]. Journal of Neuroscience, 2014, 34(24): 8324-8332.
[6] García-Heredia A, Pohane A A, Melzer E S, et al. Peptidoglycan precursor synthesis along the sidewall of pole-growing mycobacteria. eLife, 7[J]. e, 2018, 37243.
NADA-green是一种荧光D-氨基酸探针，适用于标记活细菌中的肽聚糖，最大激发/发射波长~450/555nm[1]。NADA-green能够被有效地掺入到不同细菌的肽聚糖层中，强烈导致细菌细胞群体的外围和中间标记，而不会影响生长速率[2]。NADA-green能够用于检测大肠杆菌中修饰的胞壁肽[3]。NADA-green能够用于标记活螺旋体[4]。NADA-green能够激活 GPCR大麻素1（CB1）和瞬时受体电位香草素1（TRPV1）受体[5]。NADA探针主要报告L,D-转肽酶活性、四肽底物或两者兼有[6]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解NADA-green，配制10mM母液。
注意：未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用实验缓冲液稀释母液到所需的工作浓度，例如：25μM[1]。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. 用NADA-green标记细胞壁[1](来自文献,仅做参考)
（1）当培养物OD600达到0.8时，取500µL样品，离心收集细胞，弃上清。
（2）将细胞沉淀重悬于150µL新鲜培养基，加入25µM NADA-green染料，37°C摇床避光孵育10min。离心收集细胞，弃上清。
（3）用200µL PBS轻柔洗涤1次，去除未结合染料，重悬于150µL新鲜培养基中备用。
（4）取标记后的细胞悬液，离心并用200µL PBS再次洗涤，彻底去除培养基成分。重悬细胞于50µL PBS，取1µL滴加至覆盖1.2%琼脂糖薄层（预浸于PBS）的载玻片上，轻压盖玻片固定。
（5）使用结构光照明显微成像（SIM）在488nm处对NADA-green进行成像，曝光时间为30ms。
References:
[1] Pereira A R, Hsin J, Król E, et al. FtsZ-dependent elongation of a coccoid bacterium[J]. MBio, 2016, 7(5): 10.1128/mbio. 00908-16.
| Cas No. | 2253733-11-6 | SDF | |
| 别名 | NADA hydrochloride | ||
| Canonical SMILES | N[C@@H](C(O)=O)CNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C12.Cl | ||
| 分子式 | C9H9N5O5.HCl | 分子量 | 303.66 |
| 溶解度 | DMSO : 30 mg/mL (98.79 mM; Need ultrasonic and warming) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2932 mL | 16.4658 mL | 32.9316 mL |
| 5 mM | 0.6586 mL | 3.2932 mL | 6.5863 mL |
| 10 mM | 0.3293 mL | 1.6466 mL | 3.2932 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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