Rhodamine 123 (chloride)
(Synonyms: 罗丹明123; RH-123; R-22420) 目录号 : GC15795
Rhodamine 123 (chloride)是一种细胞渗透性阳离子荧光探针，特异性识别线粒体膜电位，最大激发光/发射光为507/529nm。
Cas No.:62669-70-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Rhodamine 123 (chloride) is a cell-permeable cationic fluorescent probe that specifically recognizes mitochondrial membrane potential, with maximum excitation/emission light of 507/529nm[1]. Rhodamine 123 is a highly efficient mitochondrial fluorescent dye, mainly used to study mitochondrial function, cell viability and multidrug resistance (MDR) detection[2]. Rhodamine 123 can selectively accumulate in the mitochondria of living cells. When the mitochondrial membrane potential is normal, its fluorescence intensity is positively correlated with the membrane potential. When the mitochondria are depolarized, the dye is released into the cytoplasm, resulting in a decrease in fluorescence[3]. Rhodamine 123 is a typical ABC transporter substrate, especially P-glycoprotein (P-gp). In multidrug-resistant tumor cells, due to the active P-gp, these cells will excrete Rhodamine 123, resulting in a decrease in intracellular fluorescence intensity[4]. At a certain concentration, rhodamine dyes have low toxicity to cells, so they are often used to detect mitochondria in animal cells, plant cells and microorganisms[5].
References:
[1]Casto D, Le T, Glaser D D. RE: Rhodamine-123: A Novel Cationic Mitochondrial Probe[J]. 2011.
[2]Reungpatthanaphong P, Dechsupa S, Meesungnoen J, et al. Rhodamine B as a mitochondrial probe for measurement and monitoring of mitochondrial membrane potential in drug-sensitive and-resistant cells[J]. Journal of biochemical and biophysical methods, 2003, 57(1): 1-16.
[3]Shapiro H M. Membrane potential estimation by flow cytometry[J]. Methods, 2000, 21(3): 271-279.
[4]Ludescher C, Thaler J, Drach D, et al. Detection of activity of P‐glycoprotein in human tumour samples using rhodamine 123[J]. British journal of haematology, 1992, 82(1): 161-168.
[5]Zeng S, Liu X, Kafuti Y S, et al. Fluorescent dyes based on rhodamine derivatives for bioimaging and therapeutics: recent progress, challenges, and prospects[J]. Chemical Society Reviews, 2023.
Rhodamine 123 (chloride)是一种细胞渗透性阳离子荧光探针，特异性识别线粒体膜电位，最大激发光/发射光为507/529nm[1]。Rhodamine 123是一种高效的线粒体荧光染料，主要用于研究线粒体功能、细胞活力以及多药耐药性（MDR）的检测[2]。Rhodamine 123能够选择性积累在活细胞线粒体中，在线粒体膜电位正常时，其荧光强度与膜电位呈正相关，在线粒体去极化时，染料释放到胞质中，导致荧光减少[3]。Rhodamine 123是一种典型的ABC转运蛋白底物，特别是P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp），在多药耐药的肿瘤细胞中，由于P-gp活跃，这类细胞会将Rhodamine 123排出，导致细胞内荧光强度降低[4]。在一定浓度下，罗丹明染料对细胞的毒性较低，因此常用于检测动物细胞、植物细胞和微生物中的线粒体[5]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解Rhodamine 123，配置浓度为5mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-20μM的Rhodamine 123工作液。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. 细胞悬浮染色(以6孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗2次，每次5min。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗2次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL Rhodamine 123工作液重悬细胞，室温避光孵育5-30min，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5min，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5min。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3. 细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL Rhodamine 123工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育30-60min。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2-3次，每次5min。通过荧光显微镜进行观察。
4. 使用Rhodamine 123测量线粒体膜电位的实验步骤[1](来源文献，仅供参考)
（1）细胞培养24h后，加入指定浓度的甲基汞氯化物（methylmercuric chloride）和/或丙酮酸（pyruvate），然后再孵育3h。
（2）用 HBSS缓冲液洗涤细胞，以去除未结合的试剂。
（3）向细胞中加入5μM Rhodamine 123工作液（溶解在HBSS缓冲液中），室温避光孵育30min。
（4）用600μL冰冷的HBSS缓冲液收集孵育后的细胞。
（5）将100μL细胞悬液转移到96孔板的一半孔中，测量荧光强度，激发波长为488nm，发射波长为530nm。
（6）对300μL细胞悬液中的细胞进行计数，以标准化线粒体膜电位。
注意：荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]Lee J Y, Ishida Y, Takahashi T, et al. Transport of pyruvate into mitochondria is involved in methylmercury toxicity[J]. Scientific reports, 2016, 6(1): 21528.
| Cas No. | 62669-70-9 | SDF | |
| 别名 | 罗丹明123; RH-123; R-22420 | ||
| 化学名 | 3,6-diamino-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, monochloride | ||
| Canonical SMILES | NC1=CC2=[O+]C3=C(C(C4=CC=CC=C4C(OC)=O)=C2C=C1)C=CC(N)=C3.[Cl-] | ||
| 分子式 | C21H17N2O3 • Cl | 分子量 | 380.8 |
| 溶解度 | ≤10mg/ml in ethanol;10mg/ml in DMSO;10mg/ml in dimethyl formamide;10mg/ml in HCl(0.1M) | 储存条件 | 4°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.6261 mL | 13.1303 mL | 26.2605 mL |
| 5 mM | 0.5252 mL | 2.6261 mL | 5.2521 mL |
| 10 mM | 0.2626 mL | 1.313 mL | 2.6261 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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