Rhodamine B hydrazide
(Synonyms: 若丹明B酰肼) 目录号 : GC44832
A fluorescent probe
Cas No.:74317-53-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Rhodamine B hydrazide is a water-soluble fluorescent probe with excitation/emission spectra of 510/578 nm, respectively. It has been used for the detection of copper, peroxynitrite, nitric oxide, hydrogen peroxide, glucose, diacetyl, and hemoglobin.
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 制备染色液
(1)配置储存液:使用DMSO溶解Rhodamine B hydrazide，配置浓度为5-10mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为5-10μM的工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2. 细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：经4℃、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入Rhodamine B hydrazide工作溶液重悬细胞，37℃避光孵育2h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3. 细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 37℃避光孵育2h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4. 检测胞内产生的一氧化氮
(1) 将细胞与5μM Rhodamine B hydrazide（2.5%，v/v DMSO）于37℃避光孵育4小时；
(2) 弃去染液，使用PBS清洗两次；
(3) 将细胞与与含有375μM SNAP（S-nitroso-N-acetyl-D,L-penicillamine，一种NO释放剂）的DMEM于37℃避光孵育2小时；
(4) 使用PBS清洗两次，然后将样本浸泡于PBS中。
5. 显微镜检测：Rhodamine B hydrazide的最大激发波长和发射波长分别为546/610nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Chi-Ming Wu,et,al. Sensitivity evaluation of rhodamine B hydrazide towards nitric oxide and its application for macrophage cells imaging. 2011 Dec 5;708(1-2):141-8. doi: 10.1016/j.aca.2011.10.005. Epub 2011 Oct 8.
| Cas No. | 74317-53-6 | SDF | |
| 别名 | 若丹明B酰肼 | ||
| Canonical SMILES | CCN(CC)C1=CC2=C(C=C1)C3(C(C=CC=C4)=C4C(N3N)=O)C5=CC=C(N(CC)CC)C=C5O2 | ||
| 分子式 | C28H32N4O2 | 分子量 | 456.6 |
| 溶解度 | DMF: 30 mg/ml,DMF:PBS(pH7.2) (1:2): 0.33 mg/ml,DMSO: 20 mg/ml,Ethanol: 0.1 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.1901 mL | 10.9505 mL | 21.901 mL |
| 5 mM | 0.438 mL | 2.1901 mL | 4.3802 mL |
| 10 mM | 0.219 mL | 1.0951 mL | 2.1901 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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