SPDP (SPDP Crosslinker)
(Synonyms: 氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯,SPDP Crosslinker) 目录号 : GC30018
SPDP (SPDP Crosslinker)是一种短链交联剂，通过NHS酯基团与吡啶二硫反应基团和半胱氨酸硫醇反应，形成可切割（可还原）的二硫键，从而促进胺和硫醇基团的偶联。
Cas No.:68181-17-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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SPDP (SPDP Crosslinker) is a short-chain crosslinker that reacts with NHS ester groups and pyridyl disulfide reactive groups with cysteine thiols to form a cleavable (reducible) disulfide bond, thereby facilitating the coupling of amine and thiol groups. When SPDP reacts with free thiols, it releases a detectable byproduct—2-mercaptopyridine—allowing for easy tracking of the reaction by measuring the release of 2-mercaptopyridine at 343 nm. SPDP can be used for the synthesis of antibody-drug conjugates. The SPDP crosslinker is membrane-permeable and can crosslink within cells [1-6].
References:
[1]. Singh V, Mavila AK, et,al. Effect of lysine residue modification of ovine luteinizing hormone by heterobifunctional crosslinking reagent SPDP on subunit-subunit association, receptor binding and biological activity. Indian J Exp Biol. 1992 Nov;30(11):1093-100. PMID: 1284055.
[2]. Lobedanz S, Bokma E et,al. A periplasmic coiled-coil interface underlying TolC recruitment and the assembly of bacterial drug efflux pumps. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar 13;104(11):4612-7. doi: 10.1073/pnas.0610160104. Epub 2007 Mar 5. PMID: 17360572; PMCID: PMC1838649.
[3]. Chen L, Xu N, et,al. Nanoalbumin-prodrug conjugates prepared via a thiolation-and-conjugation method improve cancer chemotherapy and immune checkpoint blockade therapy by promoting CD8+ T-cell infiltration. Bioeng Transl Med. 2022 Jul 30;8(1):e10377. doi: 10.1002/btm2.10377. PMID: 36684090; PMCID: PMC9842047.
[4]. Karumuthil-Melethil S, Perez N, et,al. Dendritic cell-directed CTLA-4 engagement during pancreatic beta cell antigen presentation delays type 1 diabetes. J Immunol. 2010 Jun 15;184(12):6695-708. doi: 10.4049/jimmunol.0903130. Epub 2010 May 14. PMID: 20483724; PMCID: PMC2882504.
[5]. Zhang D, Guo Y, et,al. Expression of a recombinant FLT3 ligand and its emtansine conjugate as a therapeutic candidate against acute myeloid leukemia cells with FLT3 expression. Microb Cell Fact. 2021 Mar 10;20(1):67. doi: 10.1186/s12934-021-01559-6. PMID: 33691697; PMCID: PMC7948335.
[6]. Zhao H, Li L, Peng Z, et,al. Improved targeting delivery of WED-load immunoliposomes modified with SP-A mAb for the treatment of pulmonary fibrosis. Colloids Surf B Biointerfaces. 2023 Apr;224:113237. doi: 10.1016/j.colsurfb.2023.113237. Epub 2023 Mar 1. PMID: 36871414.
SPDP (SPDP Crosslinker)是一种短链交联剂，通过NHS酯基团与吡啶二硫反应基团和半胱氨酸硫醇反应，形成可切割（可还原）的二硫键，从而促进胺和硫醇基团的偶联。当SPDP与游离巯基反应时，能够释放出可检测的副产物—2-巯基吡啶，通过在343nm处测量2-巯基吡啶的释放量可以很容易地跟踪该反应。SPDP可用于合成抗体-药物偶联物。SPDP交联剂具有膜渗透性，可在细胞内交联[1-6]。
一、SPDP合成白蛋白偶联物和NanoAlb-proDOX偶联物的方案[1]
1.HSA溶解在PBS-EDTA缓冲液中(20mM sodium phosphate, 150mM NaCl, 1mM EDTA, pH 7.5)，浓度为200μM。
2.在DMSO中制备SPDP原液。在PBS-EDTA缓冲液中，将50μM HSA和1mM SPDP在室温下轻摇2h，以引发反应。
3.反应结束后，通过PD-10柱除去多余的SPDP。
4.DTT溶解在醋酸钠缓冲液中(100mM sodium acetate buffer, 100mM NaCl, pH 4.5) ，终浓度23mg/ml，将DTT溶液加入到第二步反应后的溶液中，使spdp标记的HSA最终浓度约为100μM （醋酸缓冲液与PBS-EDTA缓冲液的比例保持在1:2，以保持反应体系的pH偏酸性，防止DTT还原对天然和细胞内二硫键的影响）。
5. 反应在室温下进行1h，通过PD-10柱除去多余的DTT。
6.将还原后的HSA溶液与100μM的aldoxorubicin （AlDOX，用DMSO总反应体积的20%预稀释）在PBS-EDTA缓冲液中反应，最终HSA浓度为20μM。将混合物在室温下轻轻摇晃一夜。
7.通过PD-10柱流动去除过量的AlDOX。 NanoAlb-proDOX溶液保存在PBS缓冲液中，保存在- 80℃。
二、体内SPDP交联[2]
1.培养物生长到OD600 0.8。
2.样品洗涤两次，用交联缓冲液（20mM Na-phosphate, pH 7.5 /150mM NaCl /1mM EDTA）浓缩7.5倍，在DMSO中分别用DMSO、0.2mM SPDP或0.2mM LC-SPDP孵育30min。
3.用2.5mM Tris·HCl （pH 7.4）淬火后，收获细胞并用交联缓冲液洗涤两次。
4.细胞膜溶解于8M尿素，1% Triton X-100, 20mM Na-phosphate （pH 7.5）中。
5.用50μl Ni-NTA树脂孵育1h，从溶解膜上亲和纯化配合物，首先用10mM imidazole, 8M urea, 1% Triton X-100, 20mM Na-phosphate (pH 7.0)洗涤，然后用20mM imidazole, 1% Triton X-100, 20mM Na-phosphate (pH 7.0), 0.5M NaCl, 0.1% SDS洗涤，最后用30mM imidazole, 1% Triton X-100, 20mM Na-phosphate (pH 7.5), 150mM NaCl, 20% glycerol洗涤。所有的洗涤都进行了三次。
6.用8M urea, 50mM Tris·HCl, 2% SDS, 0.4M imidazole (pH 6.8)洗脱蛋白质，用100mM DTT还原交联剂（37℃，30 min）从络合物中分离， 最后用10% SDS/PAGE分离。
References:
[1]. Chen L, Xu N, et,al. Nanoalbumin-prodrug conjugates prepared via a thiolation-and-conjugation method improve cancer chemotherapy and immune checkpoint blockade therapy by promoting CD8+ T-cell infiltration. Bioeng Transl Med. 2022 Jul 30;8(1):e10377. doi: 10.1002/btm2.10377. PMID: 36684090; PMCID: PMC9842047.
[2]. Lobedanz S, Bokma E, et,al. A periplasmic coiled-coil interface underlying TolC recruitment and the assembly of bacterial drug efflux pumps. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Mar 13;104(11):4612-7. doi: 10.1073/pnas.0610160104. Epub 2007 Mar 5. PMID: 17360572; PMCID: PMC1838649.
| Cas No. | 68181-17-9 | SDF | |
| 别名 | 氮-琥珀星氩氨-3(2-吡啶二硫代)-酸酯,SPDP Crosslinker | ||
| Canonical SMILES | O=C(ON1C(CCC1=O)=O)CCSSC2=NC=CC=C2 | ||
| 分子式 | C12H12N2O4S2 | 分子量 | 312.36 |
| 溶解度 | DMSO : 155 mg/mL (496.22 mM) | 储存条件 | -20°C, protect from light, stored under nitrogen,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2014 mL | 16.0072 mL | 32.0143 mL |
| 5 mM | 0.6403 mL | 3.2014 mL | 6.4029 mL |
| 10 mM | 0.3201 mL | 1.6007 mL | 3.2014 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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