Suc-AAPF-pNA
(Synonyms: N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙氨酸对硝基酰苯胺,Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA) 目录号 : GC44960
Suc-AAPF-pNA（Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA）是弹性蛋白酶的比色特异性底物。Suc-AAPF-pNA在酶的作用下水解，释放出黄色的对硝基苯胺（pNA），通过比色法测定400-410nm处吸光度的变化来反映酶活性。
Cas No.:70967-97-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Suc-AAPF-pNA (Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA) is a colorimetrically specific substrate for elastase[1]. Under the action of enzymes, Suc-AAPF-pNA is hydrolyzed, releasing yellow p-nitroaniline (pNA), and the change in absorbance at 400-410 nm is measured to reflect enzyme activity through colorimetry[2]. Suc-AAPF-pNA also serves as a substrate for cathepsin G, bacillus protease, chymotrypsin, chymotrypsin, cyclophilin, and peptidyl-prolyl isomerase[3] .
The structure and group characteristics of Suc-AAPF-pNA are as follows:
(1)Succinyl group (Suc): Increases the water solubility and stability of the substrate.
(2)Amino acid sequence (Ala-Ala-Pro-Phe): This specific sequence mimics certain natural substrates and helps study the specificity of proteases towards different substrates.
(3)p-Nitroaniline (pNA): A common chromophoric group that releases a yellow product with absorbance characteristics upon hydrolysis, facilitating the monitoring of enzyme reactions through spectrometry.
References:
[1] Vinci V A. Biochemical and genetic analysis of serine proteases of Streptomyces spp[M]. The Ohio State University, 1988.
[2] Chaves-Pozo E, Valero Y, Lozano M T, et al. Fish granzyme A shows a greater role than granzyme B in fish innate cell-mediated cytotoxicity, Front. Immunol. 10 (2019) 2579[J]. 2019.
[3] Attucci S, Korkmaz B, Juliano L, et al. Measurement of free and membrane-bound cathepsin G in human neutrophils using new sensitive fluorogenic substrates[J]. Biochemical Journal, 2002, 366(3): 965-970.
Suc-AAPF-pNA（Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA）是弹性蛋白酶的比色特异性底物[1]。Suc-AAPF-pNA在酶的作用下水解，释放出黄色的对硝基苯胺（pNA），通过比色法测定400-410nm处吸光度的变化来反映酶活性[2]。Suc-AAPF-pNA还充当组织蛋白酶 G、枯草杆菌蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶、亲环蛋白和肽基脯氨酰异构酶的底物[3]。
Suc-AAPF-pNA的结构和基团特点如下：
（1）琥珀酰基团（Suc）：增加底物的水溶性和稳定性。
（2）氨基酸序列（Ala-Ala-Pro-Phe）：这一特定序列模仿了某些天然底物，有助于研究蛋白酶对不同底物的特异性。
（3）对硝基苯胺（pNA）：是一个常见的色原基团，水解后释放出具有吸光特性的黄色产物，方便通过光谱测定监测酶反应。
本协议仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解Suc-AAPF-pNA，终浓度为10 mM。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用实验缓冲液稀释储存液到所需的工作浓度，例如：0.2mM。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. Suc-AAPF-pNA对蛋白酶切割的敏感性测定[1](来自文献,仅做参考)
（1）准备材料：底物Suc-AAPF-pNA、活性酶、PBS缓冲液、96孔微量滴定板、微量滴定板读数仪。
（2）反应体系：向每个孔中加入显色底物Suc-AAPF-pNA（5μl、最终浓度为0.2 mM）、活性酶（几微升，量取决于酶活性），添加PBS使最终体积达到200 μl。
（3）反应条件：在特定温度下进行反应，如20°C。
（4）使用微孔板读数器在405 nm处分光光度测量吸光度。在以下时间点进行测量：0、20、40、60、120、180、240、300 和 360 分钟。对照：为每种底物设置一个空白孔，不添加任何酶。
（5）数据收集和分析：进行三次反应，在每个时间点减去空白测量值，使用三个反应的平均吸光度进行绘图和分析。
注意事项：该方案为使用Suc-AAPF-pNA对蛋白酶切割的敏感性测定提供指导。可以根据其他文献和具体实验要求进行调整。
References:
[1] Fu Z, Akula S, Qiao C, et al. Duodenases are a small subfamily of ruminant intestinal serine proteases that have undergone a remarkable diversification in cleavage specificity[J]. PLoS One, 2021, 16(5): e0252624.
| Cas No. | 70967-97-4 | SDF | |
| 别名 | N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-脯酰氨-苯丙氨酸对硝基酰苯胺,Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA | ||
| Canonical SMILES | OC(CCC(N[C@@H](C)C(N[C@@H](C)C(N1CCC[C@H]1C(N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(NC3=CC=C([N+]([O-])=O)C=C3)=O)=O)=O)=O)=O)=O | ||
| 分子式 | C30H36N6O9 | 分子量 | 624.7 |
| 溶解度 | DMF: 5 mg/ml,DMSO: 5 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.6008 mL | 8.0038 mL | 16.0077 mL |
| 5 mM | 0.3202 mL | 1.6008 mL | 3.2015 mL |
| 10 mM | 0.1601 mL | 0.8004 mL | 1.6008 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
