SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)
目录号 : GK10031SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)是一种具有超高灵敏度的逆转录试剂盒，8-10分钟完成gDNA的去除和cDNA的合成。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)是一种具有超高灵敏度的逆转录试剂盒，由逆转录反应预混剂和gDNA清除Mix组成，另提供一份DEPC-ddH2O用于稀释。SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)获取cDNA是两步法RT-PCR的第一步实验，获取的cDNA能够用于常规PCR或RT-PCR。如进行RT-PCR实验，建议搭配SYBR Green qPCR Master Mix (目录号：GK10002)进行使用。
SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)采用了耐高温(>50℃)的极速扩增反转录酶Super Reverse Transcriptase，能够从极低量（pg~μg级）的总RNA或poly(A) mRNA中合成cDNA，并且能够兼容GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
在许多情况下，经旋转柱或酸性胍-酚氯仿(AGPC)法等方法提取的RNA会包含少量的基因组DNA（gDNA），当检测目的基因中存在假基因或者无法横跨内含子设计引物时，基因组DNA将与cDNA一起被扩增，从而影响数据的准确性。SuperFast RT Master Mix for qPCR (gDNA remover)包含具有强力降解DNA能力的gDNA清除剂，有助于去除gDNA，无需纯化即可对RNA进行反转录。
【产品特点】
1、有效去除gDNA：只需2min，即可实现去除基因组 DNA 污染。
2、高效快速：本试剂盒采用极速扩增反转录酶和优化寡核苷酸dT引物，可实现高效逆转录，反应只需5min即可完成。
3、超高灵敏度：对极少量的 RNA 模板也可以进行良好的反转录反应。
4、超强兼容性：能够兼容GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
5、超低影响因素：超强对后续 qPCR 反应适用性：通过不断优化，本试剂盒对后续qPCR反应的影响降到最低。
操作流程：
1. 根据下表配制反应体系（冰上操作），总体积为10μl。
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5x gDNA Remover Mix |
2μl |
|
RNA template |
0.01~1μg |
|
DEPC-ddH2O |
Add to 10μl |
注意：
（1）为保证反应液配制的准确性，建议按照反应数+2的量配制预混体系，而后分装到每个反应管中，最后加入RNA；
（2）如果需使用的RNA的量大于1μg，建议按比例扩大反应体系。
2. 将反应液轻柔混匀，短暂离心使溶液集中到管底，42℃孵育2min，然后立刻置于冰上冷却。
3. 在步骤2的管中加入以下成分, 总体积为20μl（冰上操作，可根据需要扩大反应体系）：
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The reaction solution of step (2) |
10μl |
|
5x SuperFast RT Mix |
4μl |
|
DEPC-ddH2O |
6μl |
4. 将反应液轻柔混匀，短暂离心使溶液集中到管底；50℃孵育5分钟；85℃加热5s使酶失活，置于冰上进行后续实验或冷冻保存。
注意事项：
1、实验过程中请全程注意避免RNase污染。
2、反转录反应完成后的体系作为模板进行Realtime PCR时，建议稀释后直接添加，添加体积不超过PCR反应体系的20%。PCR扩增使用的耐热DNA聚合酶和热循环条件需要根据目的片段的大小、GC含量、引物特性、以及对保真度的要求等进行选择。
3、长期储存可能会造成产品发生析出情况，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
4、RNA模板的质量对cDNA合成效率有重要影响，请选择可靠的RNA提取/纯化方法。建议使用TRIzol Reagent (目录号：如GK20008或GK20009)制备RNA。
| Components | 50 rxns | 100 rxns |
| 5x gDNA Remover Mix | 100 μL | 200 μL |
| 5x SuperFast RT Mix | 200 μL | 400 μL |
| DEPC-ddH2O | 0.75 mL | 1.5 mL |
| 应用&特点 | 一种简单、快速的反转录试剂盒。
只需8-10min就可以完成gDNA的清除和cDNA的合成。 获取的cDNA能够直接作为模板进行Realtime PCR等后续操作。 |
| 运输方式 | 蓝冰运输。 |
| 储存条件 | 储存在-20°C，可稳定保存长达18个月。避免反复冻融。 |
| 用途 | 仅供研究使用!不能用于人体。 |