Tetramethylrhodamine methyl ester (perchlorate)
(Synonyms: 四甲基若丹明甲酯酸铵,TMRM, TMR methyl ester) 目录号 : GC19476
Tetramethylrhodamine methyl ester (perchlorate)是细胞渗透性阳离子荧光探针TMRM的高氯酸盐形式，特异性识别线粒体膜电位，最大激发光/发射光为552/575nm。
Cas No.:115532-50-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Tetramethylrhodamine methyl ester (perchlorate) is the perchlorate form of the cell-permeable cationic red fluorescent probe TMRM, which is commonly used to assess mitochondrial function by live-cell fluorescence microscopy or flow cytometry. TMRM specifically recognizes and measures mitochondrial membrane potential and is also used to selectively label mitochondria in living cells. The maximum excitation/emission light is 552/575nm[1].TMRM incorporated into cells is preferentially retained in mitochondria, producing bright fluorescence, and the fluorescence intensity is proportional to the mitochondrial membrane potential. Loss of mitochondrial integrity or excessive opening of the mitochondrial permeability transition pore can cause the probe to leak out of the mitochondria, resulting in reduced fluorescence[2]. Rhodamine dye has low toxicity to cells at a certain concentration, so it is often used to detect mitochondria in animal cells, plant cells, and microorganisms[3].
Tetramethylrhodamine methyl ester (perchlorate)是细胞渗透性阳离子红色荧光探针TMRM的高氯酸盐形式，常被用于通过活细胞荧光显微镜或流式细胞术评估线粒体功能。TMRM特异性识别并测定线粒体膜电位，也被用于选择性标记活细胞中的线粒体，最大激发光/发射光为552/575nm[1]。掺入细胞的TMRM优先保留在线粒体中，产生明亮的荧光，并且荧光强度与线粒体膜电位成比例。线粒体完整性的丧失或线粒体通透性转换孔的过渡开放会导致探针从线粒体中渗出，从而导致荧光减弱[2]。在一定浓度下，罗丹明染料对细胞的毒性较低，因此常用于检测动物细胞、植物细胞和微生物中的线粒体[3]。
References:
[1]. Michael B Schultz,et. Molecular and Cellular Characterization of SIRT1 Allosteric Activators. 2019:1983:133-149. doi: 10.1007/978-1-4939-9434-2_8.
[2]. Cristiano Ferlini, Giovanni Scambia. Assay for apoptosis using the mitochondrial probes, Rhodamine123 and 10-N-nonyl acridine orange. 2007;2(12):3111-4. doi: 10.1038/nprot.2007.397.
[3]. Emaus, R. K., Grunwald, R., & Lemasters, J. J. (1986). Rhodamine 123 as a probe of transmembrane potential in isolated rat-liver mitochondria: spectral and metabolic properties. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics, 850(3), 436–448.
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备TMRM染色液
（1）将低温保存的TMRM粉末置于室温回温至少20min(此步非常重要，请勿忽略操作)，低速离心片刻使粉末沉至管底。
（2）染料储存液:使用DMSO将TMRM溶解成1-5mM的储存液。配置好的储存液分装后于-20或-80℃避光保存。
（3）染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为20nM~1μM的TMRM工作液。
注意:
① 由于TMRM的使用浓度比较低，建议使用DMSO稀释，配制一个中间储存浓度(比如:100μM)；
② 请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育5-30min分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100uL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育30-60min分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、显微镜检测：TMRM在515和552 nm处有两个激发峰，最大激发光/发射光为552/575nm。
注意事项：
① 对于荧光成像分析，常用的TMRM工作浓度范围是50-200nM；
② 如果需测定某药物对膜电位的作用，需提前处理细胞，再用探针进行后续检测，同时需要设置药物未处理组和药物处理组；
③ 如果需要阳性对照，可选择FCCP(目录号:GC14328)或CCCP(目录号:GC14727)，这两种化合物都是解偶联剂，能够降低线粒体膜电位，从而防止TMRM染色；
④ 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
⑤ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Michael B Schultz,et. Molecular and Cellular Characterization of SIRT1 Allosteric Activators. 2019:1983:133-149. doi: 10.1007/978-1-4939-9434-2_8.
| Cas No. | 115532-50-8 | SDF | |
| 别名 | 四甲基若丹明甲酯酸铵,TMRM, TMR methyl ester | ||
| 化学名 | 3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate | ||
| Canonical SMILES | O=C(OC)C(C=CC=C1)=C1C2=C3C=CC(N(C)C)=CC3=[O+]C4=C2C=CC(N(C)C)=C4.O=Cl(=O)([O-])=O | ||
| 分子式 | C25H25N2O3 • ClO4 | 分子量 | 500.9 |
| 溶解度 | DMF: 30 mg/ml,DMSO: 30 mg/ml,Ethanol: slightly soluble,PBS (pH 7.2): slightly soluble | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9964 mL | 9.982 mL | 19.9641 mL |
| 5 mM | 0.3993 mL | 1.9964 mL | 3.9928 mL |
| 10 mM | 0.1996 mL | 0.9982 mL | 1.9964 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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