Thioflavin T (Basic Yellow 1)
(Synonyms: 硫黄素T; Basic Yellow 1) 目录号 : GC30031
Thioflavin T (Basic Yellow 1)是一种细胞渗透性苯并噻唑染料,与淀粉样蛋白原纤维结合时表现出增强的荧光 (Ex/Em 450/482 nm)。Thioflavin T可用于监测堆积β状聚集体,也用于组织学和蛋白质表征。
Cas No.:2390-54-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Thioflavin T (Basic Yellow 1) is a cell-permeable benzothiazole dye that exhibits enhanced fluorescence (Ex/Em: 450/482 nm) upon binding to amyloid fibrils. Useful in monitoring stacked β-sheet aggregates, Thioflavin T has also been used in histology and for protein characterization.[1]
In aqueous solution, Thioflavin T exists in the form of micelles, and its concentration is usually used to monitor fibrils by fluorescence determination (~10-20 μM). The specific conductivity change was measured at different concentrations of Thioflavin T, and the critical micelle concentration was calculated to be 4.0±0.5 μM. Thioflavin T micelles were disrupted at low pH, as observed by atomic force microscopy, and the fluorescence enhancement of Thioflavin T upon binding to amyloid fibrils also decreased several-fold when the pH dropped below 3[2].
References:
[1].Alimohammadi-Kamalabadi M, Eshraghian M, Zarindast MR, Aliaghaei A, Pishva H. Effect of creatine supplementation on cognitive performance and apoptosis in a rat model of amyloid-beta-induced Alzheimer's disease. Iran J Basic Med Sci. 2016 Nov;19(11):1159-1165.
[2].Khurana R, Coleman C, Ionescu-Zanetti C, Carter SA, Krishna V, Grover RK, Roy R, Singh S. Mechanism of thioflavin T binding to amyloid fibrils. J Struct Biol. 2005 Sep;151(3):229-38.
Thioflavin T (Basic Yellow 1)是一种细胞渗透性苯并噻唑染料,与淀粉样蛋白原纤维结合时表现出增强的荧光 (Ex/Em 450/482 nm)。Thioflavin T可用于监测堆积β状聚集体,也用于组织学和蛋白质表征[1]。
在水溶液中,Thioflavin T 以胶束形式存在,其浓度通常用于通过荧光测定法监测原纤维(~10 -20 μM)。Thioflavin T的不同浓度下测量比电导率变化,临界胶束浓度计算为 4.0±0.5 μM。Thioflavin T 胶束在低 pH 值下被破坏,如通过原子力显微镜观察到的,Thioflavin T 与淀粉样蛋白原纤维结合后的荧光增强在 pH 值降至 3 以下时也减少了几倍[2]。
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
实验方案:
1. 制备染色液:
(1)蛋白实验染色:将Thioflavine T溶解于1xPBS中,得到浓度为1mM的染料工作液;
(2)组织切片染液:将Thioflavine T溶解于50%乙醇中,得到浓度为0.05 w/v%的染料工作液。
2. 蛋白染色
(1)在黑色96孔板中使用PBS稀释Thioflavine T,使每个孔中Thioflavine T 的最终浓度为 25 μM(每孔体积 = 100 μL);
(2)提前准备在室温下解冻 α 突触核蛋白等分试样;
(3)将 10 μM 预成型原纤维或 100 μM 单体(或两者)加入适当的孔中。将孔内容物上下混合;
注:以上为参考浓度,实际应用中需进行预实验优化。
(4)密封板并置于 37°C 的振荡培养箱 (600 rpm) 中;
(5)在1 至 72 小时内,定期使用荧光酶标仪在激发波长和发射波长分别为450/482nm条件下测量荧光值。
3. 组织切片染色:
(1)Thioflavine T适用于石蜡切片染色;
(2)将处理后的切片与 Thioflavine T 在黑暗中孵育 8 分钟。请根据具体实验需求自行摸索最佳染色时间;
(3)将切片分别在80% 乙醇和H2O中洗涤两次,每次10秒;
(4)使用不含 DAPI 的 抗淬灭封固剂封固,在激发波长和发射波长分别为450/482nm条件下使用荧光显微镜下观察。
注意事项:
1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Cas No. | 2390-54-7 | SDF | |
别名 | 硫黄素T; Basic Yellow 1 | ||
Canonical SMILES | CC1=CC=C2[N+](C)=C(C3=CC=C(N(C)C)C=C3)SC2=C1.[Cl-] | ||
分子式 | C17H19ClN2S | 分子量 | 318.86 |
溶解度 | DMSO : 22.5 mg/mL (70.56 mM);Water : 2mg/mL (39.20 mM) | 储存条件 | Store at RT, protect from light |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 3.1362 mL | 15.6809 mL | 31.3617 mL |
5 mM | 0.6272 mL | 3.1362 mL | 6.2723 mL |
10 mM | 0.3136 mL | 1.5681 mL | 3.1362 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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