X-Gal
(Synonyms: 5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷,BCIG) 目录号 : GC15620
X-Gal被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，因此常用于转基因筛选试验，如β-半乳糖苷酶的蓝白斑筛选或原位染色试验。
Cas No.:7240-90-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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X-Gal is hydrolyzed blue by β-galactosidase, so it is often used in transgenic screening tests, such as blue-white spot screening or in situ staining assay for β-galactosidase [1-2].
X-gal (1 mg/ml / 0.3 mg/ml) staining is also used to analyze protein expression pattern. It can be used to detect expression pattern of beta-galactosidase in vivo [3-4]. X-gal (1 mg/ml) can also be used to visualize LacZ activity in mouse embryos and adult mice[5-6].
References:
[1]. Green MR, Sambrook J. Screening Bacterial Colonies Using X-Gal and IPTG: α-Complementation. Cold Spring Harb Protoc. 2019 Dec 2;2019(12). doi: 10.1101/pdb.prot101329. PMID: 31792144.
[2]. Trimborn L, Hoecker U,et,al. A Simple Quantitative Assay for Measuring β-Galactosidase Activity Using X-Gal in Yeast-Based Interaction Analyses. Curr Protoc. 2022 May;2(5):e421. doi: 10.1002/cpz1.421. PMID: 35567769.
[3]. Kokubu H, Lim J. X-gal Staining on Adult Mouse Brain Sections. Bio Protoc. 2014;4(5):e1064. doi: 10.21769/bioprotoc.1064. Epub 2014 Mar 5. PMID: 27390760; PMCID: PMC4932900.
[4]. Burn SF. Detection of β-galactosidase activity: X-gal staining. Methods Mol Biol. 2012;886:241-50. doi: 10.1007/978-1-61779-851-1_21. PMID: 22639266.
[5]. Watanabe-Takano H, Fukumoto M, et,al. Protocol for whole-mount X-gal staining combined with tissue clearing in embryo and adult mouse using CUBIC. STAR Protoc. 2022 Jan 20;3(1):101127. doi: 10.1016/j.xpro.2022.101127. PMID: 35118431; PMCID: PMC8792446.
[6]. Gierut JJ, Jacks TE, et,al. Whole-mount X-Gal staining of mouse tissues. Cold Spring Harb Protoc. 2014 Apr 1;2014(4):417-9. doi: 10.1101/pdb.prot073452. PMID: 24692489; PMCID: PMC4169236.
X-Gal被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，因此常用于转基因筛选试验，如β-半乳糖苷酶的蓝白斑筛选或原位染色试验[1-2]。
X-gal (1mg /ml / 0.3 mg/ml)染色法可以用于分析蛋白表达谱。它可用于检测体内β -半乳糖苷酶的表达模式[3-4]。X-gal (1 mg/ml)也可用于观察小鼠胚胎和成年小鼠的LacZ活性[5-6]。
X-gal储备溶液配置：
用二甲基甲酰胺溶解X-gal制备20mg/ml存储溶液。称取20g X-gal，加入1L二甲基甲酰胺(DMF)，溶解后装入瓶中，用铝箔包好避光，-20℃保存。不需过滤除菌。
成年小鼠脑切片X-gal染色[1]：
1. 小鼠用PBS灌注5分钟，然后用4% PFA/PBS灌注5分钟。
2. 将小鼠脑解剖出来，用4% PFA/PBS在4℃下固定4小时。
3. 固定脑用PBS洗涤三次，然后用20%的蔗糖孵育过夜(或直到样品下沉)，然后用30%的蔗糖孵育过夜。
4. 大脑安装在低温模具上，并在-80℃保存。
5. 使用低温恒温器制作40 μm的cyro切片，并安装在玻片上。
6. 玻片用染色缓冲液在室温下洗涤10分钟。
7. 玻片加入1 mg/ml X-gal，在37℃下加入5 mM铁氰化钾和5 mM铁氰化钾的染色缓冲液中孵育，直至显色。这一步通常需要3个小时才能完成。不要让样品干燥。每张玻片使用100-200 μl X-gal溶液。
8. 用PBS洗涤染色样品三次(每次5分钟)。
9. 载玻片用系列乙醇(50%，75%，90%，100%，各2分钟)脱水。
10. 载玻片用中性树胶封片剂保存，可以在室温下储存或者用于成像。
Reference:
[1]. Kokubu H, Lim J. X-gal Staining on Adult Mouse Brain Sections. Bio Protoc. 2014;4(5):e1064. doi: 10.21769/bioprotoc.1064. Epub 2014 Mar 5. PMID: 27390760; PMCID: PMC4932900.
| Cas No. | 7240-90-6 | SDF | |
| 别名 | 5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷,BCIG | ||
| 化学名 | (2S,3R,4S,5R,6R)-2-[(5-bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl)oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol | ||
| Canonical SMILES | C1=CC(=C(C2=C1NC=C2OC3C(C(C(C(O3)CO)O)O)O)Cl)Br | ||
| 分子式 | C14H15BrCINO6 | 分子量 | 408.63 |
| 溶解度 | ≥ 109.4 mg/mL in DMSO, ≥ 3.7 mg/mL in EtOH with ultrasonic and warming | 储存条件 | store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4472 mL | 12.236 mL | 24.472 mL |
| 5 mM | 0.4894 mL | 2.4472 mL | 4.8944 mL |
| 10 mM | 0.2447 mL | 1.2236 mL | 2.4472 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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